細菌在自然界必然不斷經(jīng)受周圍環(huán)境中各種因素的影響。當(dāng)環(huán)境適宜時,細菌能進行正常的新陳代謝而生長繁殖;若環(huán)境條件變化,可引起細菌的代謝和其他性狀發(fā)生變異;若環(huán)境條件改變劇烈,可使細菌生長受到抑制或?qū)е滤劳。因此掌握微生物對周圍環(huán)境的依賴關(guān)系,在醫(yī)療實踐中,一方面可創(chuàng)造有利條件,促進微生物的生長繁殖,從病理材料中分離培養(yǎng)病原微生物,有助于傳染病的診斷以及制備疫苗,來預(yù)防某些傳染病;另一方面,也可利用環(huán)境對細菌不利因素,抑制或殺滅病原微生物,以達到消毒滅菌的目的。本節(jié)重點介紹外界環(huán)境對細菌不利因素,提高對消毒滅菌的認(rèn)識以便在實際工作中加以應(yīng)用。
消毒(Disinfection)殺滅病原微生物的方法。用以消毒的藥物稱為消毒劑(Disinfectants)一般消毒劑在常用濃度下,只對細菌繁殖體有效。對于芽胞則需要提高消毒劑的濃度和延長作用的時間。
滅菌(Sterilization)殺滅物體上所有的微生物(包括病原體和非病原體的繁殖體和芽胞)的方法。因此,滅菌比消毒的要求高;但在日常生活中,消毒和滅菌這兩個術(shù)語往往通用。
無菌(Asepsis)物體上或容器內(nèi)無活菌存在的意思。無菌操作是防止微生物進入機體或其他物品的操作技術(shù)。例如,進行外科手術(shù)或微生物學(xué)實驗時,須注意無菌操作。
防腐(Antisepsis)防止或抑制微生物生長繁殖的方法。用于防腐的化學(xué)藥物稱為防腐劑。許多藥物在低濃度時只有 抑菌作用,濃度增高或延長作用時間,則有殺菌作用。
消毒與滅菌技術(shù)的選擇,取決于多種因素。在實際工作中應(yīng)根據(jù)消毒滅菌的對象和目的要求不同,以及條件的不同,選擇不同的合適方法。
一、物理因素
各種物理因素對細菌都能產(chǎn)生一定的影響作用。
。ㄒ)熱力滅菌
高溫對細菌有明顯的致死作用。熱力滅菌主要是利用高溫使菌體變性或凝固,酶失去活性,而使細菌死亡。但是,更細微的變化已發(fā)生于細菌凝固之前。有人認(rèn)為DNA單螺旋的斷裂可能是主要的致死因素。細菌蛋白質(zhì)、核酸等化學(xué)結(jié)構(gòu)是由氫鍵連接的,而氫鍵是較弱的化學(xué)鍵,當(dāng)菌體受熱時,氫鍵遭到破壞,蛋白質(zhì)、核酸、酶等結(jié)構(gòu)也隨之被破壞,失去其生物學(xué)活性,與細菌致死有關(guān)。此外,高溫亦可導(dǎo)致胞膜功能損傷而使小分子物質(zhì)以及降解的核糖體漏出。干熱的致死作用與濕熱不盡相同,一般屬于蛋白變性、氧化作用受損和電解質(zhì)水平增高的毒力效應(yīng)。
熱力滅菌時最可靠而普遍應(yīng)用的滅菌法,包括濕熱滅菌和干熱滅菌法。
1.濕熱滅菌法
在同樣的溫度下,溫?zé)岬臍⒕Ч雀蔁岷,其原因有:①蛋白質(zhì)凝固所需的溫度與其含水量有關(guān),含水量愈大,發(fā)生凝固所需的溫度愈低。濕熱滅菌的菌體蛋白質(zhì)吸收水分,因較大同一溫度的干熱空氣中易于凝固。②溫?zé)釡缇^程中蒸氣放出大量潛熱,加速提高濕度。因而濕熱滅菌比干熱所要溫度低,如在同一溫度下,則濕熱滅菌所需時間比干熱短。③濕熱的穿透力比干熱大,使深部也能達到滅菌溫度,故濕熱比干熱收效好。
濕熱滅菌法包括有:
(1)煮沸法:煮沸100℃,5分鐘,能殺死一般細菌的繁殖體。許多芽胞需經(jīng)煮潮5~6小時才死亡。水中加入2%碳酸鈉,可提高其沸點達105℃。既可促進芽胞的殺滅,又能防止金屬器皿生銹。煮沸法可用于飲水和一般器械(刀剪、注射器等)的消毒。
。2)流通蒸汽滅菌法:利用100℃左右的水蒸汽進行消毒,一般采用流通蒸汽滅菌器(其原理相當(dāng)于我國的蒸籠),加熱15到39分鐘,可殺死細菌繁殖體。消毒物品的包裝不宜過大、過緊以利于蒸汽穿透。
。3)間歇滅菌法:利用反復(fù)多次的流通蒸汽,以達到滅菌的目的。一般用流通蒸汽滅菌器,100℃加熱15~30分鐘,可殺死其中的繁殖體;但芽胞尚有殘存。取出后放37℃孵箱過夜,使芽胞發(fā)育成繁殖體,次日再蒸一次,如此連續(xù)三次以上。本法適用于不耐高溫的營養(yǎng)物(如血清培養(yǎng)基)的滅菌。
。4)巴氏消毒法(Pasteurization):利用熱力殺死液體中的病原菌或一般的雜菌,同時不致嚴(yán)重?fù)p害其質(zhì)量的消耗方法。由巴斯德創(chuàng)用以消毒酒精類,故名。加溫61.1~62.8℃半小時,或71.7℃15~30秒鐘。常用于消毒牛奶和酒類等。
(5)高壓蒸汽滅菌法:壓力蒸汽滅菌是在專門的壓力蒸汽滅菌器中進行的,是熱力滅菌中使用最普遍、效果最可靠的一種方法。其優(yōu)點是穿透力強,滅菌效果可靠,能殺滅所有微生物。
目前使用的壓力滅菌器可分為兩類:下排氣式壓力滅菌器和預(yù)真空壓力滅菌器。適用于耐高溫、耐水物品的滅菌。
2.干熱滅菌法
干熱滅菌比濕熱滅菌需要更高的溫度與較長的時間。
(1)干烤:利用干烤箱,加熱160~180℃2小時,可殺死一切微生物,包括芽胞菌。主要用于玻璃器皿、瓷器等的滅菌。
(2)燒灼和焚燒:燒灼是直接用火焰殺死微生物,適用于微生物實驗室的接種針等不怕熱的金屬器材的滅菌。焚燒是徹底的消毒方法,但只限于處理廢棄的污染物品,如無用的衣物、紙張、垃圾等。焚燒應(yīng)在專用的焚燒爐內(nèi)進行。
(3) 紅外線:紅外線輻射是一種0.77~1000微米波長的電磁波,有較好的熱效應(yīng),尤以1~10微米波長的熱效應(yīng)最強。亦被認(rèn)為一種干熱滅菌。紅外線由紅外線燈泡產(chǎn)生,不需要經(jīng)空氣傳導(dǎo),所以加熱速度快,但熱效應(yīng)只能在照射到的表面產(chǎn)生,因此不能使一個物體的前后左右均勻加熱。紅外線的殺菌作用與干熱相似,利用紅外線烤箱滅菌的所需溫度和時間亦同于干烤。多用于醫(yī)療器械的滅菌。
人受紅外線照射較長會感覺眼睛疲勞及頭疼;長期照射會造成眼內(nèi)損傷。因此,工作人至少應(yīng)戴能防紅外線傷害的防護鏡。
。4)微波:微波是一種波長為1毫米到1米左右的電磁波,頻率較高,可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì),但不能穿透金屬表面。微波能使介質(zhì)內(nèi)雜亂無章的極性分子在微波場的作用下,按波的頻率往返運動,互相沖撞和磨擦而產(chǎn)生熱,介質(zhì)的溫度可隨之升高,因而在較低的溫度下能起到消毒作用。一般認(rèn)為其殺菌機理除熱效應(yīng)以外,還有電磁共振效應(yīng),場致力效應(yīng)等的作用。消毒中常用的微波有2450MHZ與915MHZ兩種。微波照射多用于食品加工。在醫(yī)院中可用于檢驗室用品、非金屬器械、無菌病室的食品食具、藥杯及其它用品的消毒。
微波長期照射可引起眼睛的晶狀混濁、睪丸損傷和神經(jīng)功能紊亂等全身性反應(yīng),因此必須關(guān)好門后才開始操作。