�。ǘ�)生理學改變
1．免疫功能：由于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、淋巴組織發(fā)育不良，淋巴小結(jié)內(nèi)缺乏生發(fā)中心，產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱（在檢查無菌動物的無菌性時，血清丙種球蛋白陰性可以作為無菌的一個輔助證據(jù))，又因為體內(nèi)無微生物和寄生蟲，血中無抗體，血清殺菌力低，吞噬細胞噬菌力也低，因此對微生物感染異常敏感，某些病原性弱和必須經(jīng)腹腔或顱腦接種才能感染普通動物的微生物很容易感染無菌動物。
2．生長率：無菌條件下對不同種屬影響不同。無菌鳥類生長率高于同種的普通鳥類；無菌大小鼠與普通鼠差不多；無菌豚鼠和無菌兔生長率比普通者慢。因腸內(nèi)無菌，不能幫助消化纖維素以提供機體所需要的營養(yǎng)。
3．生殖：無菌條件對動物的生殖影響不大。大鼠和小鼠因出生無感染身體較好；無菌豚鼠及兔比普通者繁殖力低，可能因大盲腸之故。
4．代謝：血中含氮量少，腸管對水的吸收率低，代謝周期比普通動物長。
5．營養(yǎng)：與動物品種有關(guān)，豚鼠和兔的腸道長，故有影響。無菌動物腸道上皮細胞更新率比一般動物低，腸壁的物質(zhì)交換也較慢。無菌條件下的各種動物通過膽汁排泄代謝產(chǎn)物的速率均減慢；如切除無菌動物的盲腸，則無菌動物與普通動物的差異縮小。無菌豚鼠和無菌兔在切除盲腸后，其生殖率增加。關(guān)于盲腸增大的原因，曾進行過許多研究，尚無明確結(jié)果。推測可能是因為飼料中的有毒物質(zhì)刺激盲腸，使其增大加長、彈性減少。正常情況下飼料中的毒性物質(zhì)可被腸道菌分解。無菌條件對兔及豚鼠的盲腸產(chǎn)生的影響最大，Sabourdy曾稱量過無菌豚鼠的盲腸（連同腸內(nèi)容物)，結(jié)果盲腸相當于豚鼠體重的1/3。
6．壽命：無菌大鼠和小鼠比普通者長壽。
四、無菌動物技術(shù)
無菌動物在自然界并不存，必須用人為的方法養(yǎng)育而成。一般將臨產(chǎn)前的健康動物用麻醉藥品或拉斷頸椎處死后，立即浸泡在37℃滅菌液中，送進無菌室（或無菌隔離器)，按無菌手術(shù)進行剖腹，切除帶胎子宮（子宮內(nèi)首先應無菌)，將其浸入消毒液里并立即輸送到另一只隔離器中，切開子宮取胎，經(jīng)用滅菌紗布揩拭仔體并斷臍（電刀切斷)后，放入隔離器內(nèi)人工喂乳或用其他品系的無菌雌鼠作保姆代養(yǎng)。象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩，故采用保姆代養(yǎng)。而象豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。另外，象禽類、魚類、昆蟲類等，因是在卵中無菌的前提下作出的，故用藥物將卵周圍滅菌后移入滅菌隔離器內(nèi)使其孵化即可，而且，這些動物，一般在出生后就能自力采食，故較易育成。
無菌動物的理論基礎(chǔ)和實踐依據(jù)在于胎盤屏障和屏障觀念，根據(jù)這個基礎(chǔ)開展了無菌動物工作。在無菌條件下取仔，一切操作在無菌隔離器內(nèi)進行。
（一)哺乳類無菌動物技術(shù)
小動物作子宮切除術(shù)（Hysterectomy)；大動物做子宮切開術(shù)（Hysterotomy)獲得幼仔。子宮切開對兔子可用三次，但易污染，不如子宮切除術(shù)取仔安全。大動物主要從經(jīng)濟角度考慮，采用子宮切開取仔術(shù)。取仔程序如下：
1．腹部剃毛或用硫化鈉脫毛劑脫毛。
脫毛劑配制：
硫化鋇 50克
濕潤劑 4克
甘油10克
水50毫升
作成類糊狀用以脫毛。
2．處死妊娠雌鼠。一般不用化學藥品處死，以兔影響胎鼠。如用化學藥品時，應使劑量對胎體無影響時方可使用。一般對小鼠用斷頸髓處死。較大的動物如豚鼠用氟烷（Halothane Oxygen)吸入麻醉，不用乙醚麻醉。
3．處死的雌鼠浸泡于37℃滅菌液中2分鐘。滅菌液配制：
福爾馬林20%
季銨5%
芐烷氨水75%
4．將妊娠鼠固定住，并于腹部粘上滅菌膠布。
5．剖腹。
6．取出子宮：
�、艑⒆訉m放入滅菌液中，之后將盛子宮的小筐遞到另一隔離器中取胎鼠。這樣，在隔離器中有充分的時間檢查其是否污染。
⑵如將子宮直接在無特定病原體條件下取胎和飼養(yǎng)則有危險，可能受染而無機會觀察。
7．用剪刀剪開子宮壁，取出胎鼠，輕按以幫助呼吸，不立即斷臍，待呼吸正常時再用電刀切斷臍帶。
8．分開胎盤，將取出的幼仔放到代乳母鼠身邊，把代乳母鼠的幼仔取出與剖腹產(chǎn)取出的幼鼠接觸，使之有同樣的氣味，便于代養(yǎng)。
9．剖腹取胎的時限。
�、判∈蟆⒋笮。�9-10分鐘；
�、齐嗍螅�5分鐘，因豚鼠耐缺氧能力低弱。
乳汁制備：首先用擠奶機獲得兔奶，冷凍干燥，經(jīng)γ射線消毒，保存于塑料袋中，貯放在隔離器內(nèi)。需用時將奶粉加水恢復干燥前的濃度，不加維生素和其他成份。須注意人工喂養(yǎng)經(jīng)常出現(xiàn)因灌喂入肺而致死。家兔3次/日，后來發(fā)現(xiàn)1次/日即可。根據(jù)家兔年齡及體重考慮每兩日加量1次。第1天喂5毫升，可維持1次/日；以后逐漸增加到4-5次/日；第3周時即可吃飼料。
自1958年以來，小鼠不用人工喂養(yǎng)。Sabourdy開始培育無菌小鼠時，每天喂5次，有時半夜去喂小鼠，實際上無此必要。自廣泛使用隔離器后，都靠代乳鼠喂養(yǎng)。Sabourdy還認為中國如開始培育無菌動物工作，不必采用人工喂養(yǎng)，因現(xiàn)在各國有許多實驗動物中心有無菌動物，運輸也方便，可以從他的或別的實驗室引進代乳鼠。醫(yī)學.全在.線www.med126.com
代乳鼠的最適期：在隔離器中交配，約于部腹服胎前1-2天產(chǎn)仔。C3H和C57BL品系為常用的代乳鼠。用作手術(shù)取胎的母鼠最好不是第一胎的。一般用做交配的雄鼠下午時放入，第二天上午8時將雄鼠取出。做剖腹產(chǎn)需了解雌鼠的妊娠期。特種鼠的妊娠期取足月的。小鼠性周期為4天多，如用100只雌鼠交配，應有25只雌鼠受孕，實際上若用10%已屬不錯。如果10只雌鼠受乳，用Whitten氏反應法，100只雌鼠可有30%受孕。
（二)鳥類無菌動物技術(shù)
常用鵪鶉，也用雞。研究營養(yǎng)用無菌雞，要選育無白血病的雞群。飼養(yǎng)無菌雞比較容易。雛雞出殼即可啄食，不用人工喂飼。關(guān)鍵在于消毒卵殼，因卵殼不平，不易滅菌。首先選外殼干凈的受精卵。按以下程序進行：
1．將受精卵放至濕潤劑中。
2．再放入2%升汞中浸12分鐘。
3．將浸泡過的受精卵放入隔離器中孵育。
建立無白血病雞群無從母雞選起，用這種雞卵培育無菌雞。否則僅外殼消毒是消滅不了雞白血病病毒。
五、無菌動物的飼料和飼育裝置
�。ㄒ�)無菌動物的飼料
無菌動物的飼料水必須符合下列要求：
1．沒有活的微生物和寄生蟲或蟲卵，因此，必須經(jīng)過充分的滅菌，一般多用高壓滅菌。有條件可用60鈷照射滅菌，效果好，而且營養(yǎng)成份破壞少，保存時間長。根據(jù)我們研究證明采用1.5-2.5Mrd60鈷γ線照射的飼料滅菌效果顯著，能保持無菌狀態(tài)達4個月以上；營養(yǎng)成份破壞較高壓滅菌法顯著少，如維生素B243.7%、E17.5%、C8.5%、蛋白質(zhì)11%、胱氨酸17.5%、賴氨酸14等；飼喂LACA小鼠和裸鼠后效果良好。值得推廣應用。
2．必須補充因高壓滅菌而破壞的營養(yǎng)成份，如：維生素B1、維生素C、泛酸等。補充的營養(yǎng)成份用濾菌器過濾后加入飼料或飲水中飼喂。為了減少營養(yǎng)成份的破壞，最好用放射線滅菌或環(huán)氧乙烷滅菌法代替高壓滅菌法。
3．無菌動物沒有腸道正常菌叢，飼料中還須補充這些細菌合成的營養(yǎng)成份。
4．飼料的組成、形態(tài)和氣味等應盡可能適合動物的習性和嗜好。
