玻璃酸酶的測定—玻璃酸酶測定法

本方法采用玻璃酸酶測定法測定玻璃酸酶的效價。

本方法適用于玻璃酸酶。

精密稱取本品適量，加冷的水解明膠稀釋劑制成每1mL中約含1.5個單位的溶液，照玻璃酸酶測定法，測定玻璃酸酶的效價。

1. 醋酸-醋酸鉀緩沖液

2. 磷酸鹽緩沖液

3.水解明膠

4. 水解明膠稀釋劑

5. 血清貯備液

6. 血清溶液

7. 玻璃酸鉀貯備液

8. 玻璃酸鉀溶液

1. 醋酸-醋酸鉀緩沖液

取醋酸鉀14g與冰醋酸20.5mL，加水使成1000mL。

2. 磷酸鹽緩沖液

取磷酸二氫鈉2.5g、無水磷酸氫二鈉1.0g與氯化納8.2g，加水使成1000mL。

3.水解明膠

取明膠50g，加水1000mL，在121℃加熱90分鐘，然后冷凍干燥。

4. 水解明膠稀釋劑

取磷酸鹽緩沖液與水各250mL，加水解明膠330mg搖勻，在0-4℃保存。如溶液不發(fā)生混濁，可繼續(xù)使用。

5. 血清貯備液

取新鮮牛血清或凍干牛血清（先用水溶解并稀釋至標示量體積)1份，加醋酸-醋酸鉀緩沖液9份稀釋，再以4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.1，放置18-24小時后再用。在0-4℃保存，應可用30日。

6. 血清溶液

血清貯備液中血清總固體（取牛血清適量，置裝有潔凈沙粒并在105℃干燥至恒重)在8%左右著，取1份，用醋酸-醋酸鉀緩沖液3份；血清總固體在5%左右著，取一份，用醋酸-醋酸鉀緩沖液2份稀釋。臨用時配制。

7. 玻璃酸鉀貯備液

取預先經(jīng)五氧化二磷減壓干燥48小時的玻璃酸鉀，加水制成每1mL中含0.5mg的溶液。在0℃以下保存，可應用30日。

8. 玻璃酸鉀溶液

取玻璃酸鉀貯備液一份，用磷酸鹽緩沖液1份稀釋。臨用時配制。

9. 供試品溶液的制備

按估計單位精密稱取本品適量，加冷的水解明膠稀釋制成每1mL中約含1.5個單位的溶液，作為供試品溶液。臨用時配制。

10. 對照品溶液的制備

精密稱取玻璃酸酶對照品適量，加冷的水解明膠稀釋制成每1mL中約含1.5個單位的溶液，作為對照品溶液。臨用時配制。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

1.供試品的測定

取大小相同的試管6支，依次加供試品溶液0.20mL，0.30mL，0.40mL，各2支；再依次相應加入水解明膠稀釋液0.30mL，0.20mL，0.10mL，每隔30秒鐘順序加入玻璃酸鉀溶液0.50mL，使每管的總體積為1.00mL，搖勻，置37℃±0.5℃水浴中；每管準確保溫30分鐘后，每隔30秒順序取出，立即順序加入血清溶液4.0mL，搖勻，在室溫放置 30分鐘，搖勻，在640nm的波長處測定吸光度，同時以磷酸鹽緩沖液0.50mL代替玻璃酸鉀溶液，加水解明膠稀釋液0.50mL，搖勻，按上述方法自“置37℃±0.5℃水浴中”起同法操作，作為空白，計算，即得。