維生素D3的測定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定維生素D3的含量。

本方法適用維生素D3。

供試品和內(nèi)標(biāo)均制成甲醇溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測維生素D3（C₂₇H₄₄O)和內(nèi)標(biāo)鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，計(jì)算出其含量。

1.異辛烷

2. 正己烷

3. 正戊醇

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

硅膠為填充劑，維生素D2峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：正己烷＋正戊醇= 997 3

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

1. 稱取供試品

精密稱取本品25mg，置100mL棕色量瓶中。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取維生素D3對照品和維生素D3對照品25mg，置100mL棕色量瓶中，加異辛烷80mL，避免加熱，超聲處理1分鐘使完全溶解，并加異辛烷至刻度，搖勻，沖氮密塞，避光，0℃以下保存。

3. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

取鄰苯二甲酸二甲酯25mg，置25mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度，即得。

4. 供試品溶液的制備

上述供試品加三甲基戊烷80mL，避免加熱，用超聲處理1分鐘使溶解，加三甲基戊烷稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取上述供試品溶液與對照品溶液，20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定維生素D3和內(nèi)標(biāo)鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p673。