注射用糜蛋白酶—糜蛋白酶的測定—酶效價測定法

本方法采用酶效價測定法測定注射用糜蛋白酶中糜蛋白酶的效價。

本法系測定糜蛋白酶對底物降解的速率，以測定供試品的效價。

1. N-乙酰－L－酪氨酸乙酯

2. 磷酸鹽緩沖液

3. 0.0012mol/L鹽酸溶液

紫外－可見分光光度計

1.磷酸鹽緩沖液

取0.067mol/L磷酸二氫鉀溶液38.9mL與0.067mol/L磷酸氫二鈉溶液61.1mL，混合，pH值7.0。

2.底物溶液的制備

取N-乙酰－L－酪氨酸乙酯23.7mg，置100mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液50mL，溫熱使溶解，冷卻后再稀釋至刻度，搖勻。冰凍保存，但不得反復凍融。

3. 供試品溶液的制備

取本品3支，分別加0.0012mol/L鹽酸溶液溶解并使成每1mL中含12～16糜蛋白酶的溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

取0.0012mol/L鹽酸溶液0.2mL與底物溶液3.0mL，照紫外－可見分光光度法，在25±0.5°C，于237nm的波長處測定并調(diào)節(jié)吸光度為0.200。再取供試品溶液0.2mL與底物溶液3mL，立即計時并搖勻，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘（重復一次)，吸光度的變化率應恒定，恒定時間不少于3分鐘。若變化率不能保持恒定，可用較低濃度另行測定，每30秒的吸光度變化率應控制再0.008～0.012，以吸光度為縱坐標，時間為橫坐標，作圖，取在3分鐘那呈直線的部分，計算。