方法名稱： |
顛茄酊—阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿的測定—高效毛細管電泳法 |
應用范圍： |
本方法采用高效毛細管電泳法測定顛茄酊中阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿的含量。 本方法適用于中成藥顛茄酊。 |
方法原理： |
供試品加磷酸鹽緩沖溶液及內(nèi)標溶液，用雙蒸水稀釋定容,混勻，以2000r/min離心5min后，量取上清液進行高效毛細管電泳分析。 |
試劑： |
1. 四氫呋喃 2. 50mmol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH8.0) |
儀器設備： |
1 儀器 1.1 高效毛細管電泳儀 1.2 毛細管柱：40cm × 50μm 1.3 紫外吸收檢測器 1.4 pHs-25酸度計 2電泳分離條件 2.1 運行緩沖液：50mmol/L磷酸溶液(pH8.0) 四氫呋喃 = 9 1 2.2 電遷移進樣：5 kV × 5s 2.3 分離電壓：11kV ( )→(-) 2.4 柱溫：24℃ 2.5 檢測波長：200nm |
試樣制備： |
1.內(nèi)標溶液的制備 精密稱取麻黃適量，用雙蒸水稀釋配成制成每1mL含麻黃140μg的溶液,作為內(nèi)標溶液。 2.對照品溶液的制備 精密稱取硫酸阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿對照品適量，置于同一5mL量瓶中，用雙蒸水稀釋配成制成含阿托品600μg/mL、東莨菪堿90μg/mL、山莨菪堿100μg/mL的混合溶液，作為對照品儲備液。 3.標準溶液的制備 精密吸取上述對照品儲備液50、100、150、200、250μL，加內(nèi)標溶液100μL，用雙蒸水稀釋定容至1mL，混勻，以2000r/min離心5min后，作為繪制標準曲線的系列濃度標準溶液。 4.供試品溶液的制備 精密量取供試品400μL，加50mmol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH8.0)100μL，加內(nèi)標溶液100μL，用雙蒸水稀釋定容至1mL,混勻，以2000r/min離心5min后，作為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1. 標準曲線的繪制 精密吸取上述標準溶液各50μL，置高效毛細管電泳儀中測定，以對照品峰面積與內(nèi)標峰面積的比值對相應的濃度繪制標準曲線，進行線性回歸，得到各自的回歸方程。 2. 供試品的測定 精密吸取上述供試品溶液50μL，置高效毛細管電泳儀中測定，計算出其含量。 |
參考文獻： |
林梅，張正行，安登魁等. 高效毛細管電泳分離測定顛茄制劑中莨菪類生物堿. 中草藥，1998，29(8)：518-520. |
