復(fù)方扶芳藤合劑－黃芪甲苷的測(cè)定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定復(fù)方扶芳藤合劑中黃芪甲苷的含量。

供試品用氯仿振搖提取，分取上層溶液，用水飽和的正丁醇振搖提取，合并提取液，用氨試液提取，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)��?a class="channel_keylink" href="/pharm/2009/20090113071749_102838.shtml" target="_blank">乙醇溶解，通過D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫，再用乙醇 洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)�用甲醇溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，以10%硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λs=530nm， λ_R=700nm測(cè)量黃芪甲苷（C₄₁H₆₈O₁₄)吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1. 氯仿

2 .氨水

3 .甲醇

4 .正丁醇

5 .乙醇

6 .硫酸 10％硫酸乙醇溶液

1 儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2.3羧甲基纖維素鈉

2.4 D101型大孔吸附樹脂

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每 1mL含 1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品 75mL，混勻，精密量取 20mL，用氯仿振搖提取 2次，每次 30mL，分取上層溶液，用水飽和的正丁醇振搖提取 5次，第一次 30mL，其余每次 20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液提取 2次 （100mL、 80mL)，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)��?10%乙醇 5mL使溶解，通過D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑 1.5cm，長(zhǎng) 12cm)，用水50mL洗脫，棄去洗脫液，再用 40%乙醇 30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)�用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和0.2％羧甲基纖維素鈉水溶液3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2. 點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液 4μL、對(duì)照品溶液2μL與6μL，分別交叉點(diǎn)于同一以0.1%羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以〔正丁醇－醋酸乙酯－水（4：1：5)的上層溶液〕－甲醇（10：1)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，展距16cm以上，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在 100℃加熱約 7分鐘，至斑點(diǎn)顯色清晰，取出。

4. 含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λs=530nm， λ_R=700nm， 測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.530。