| 公開(公告)號(hào) | CN1908004A |
| 公開(公告)日 | 2007.02.07 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510031955.4 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.08.01 |
| 專利名稱 | 鼻咽癌相關(guān)基因UBAP1編碼蛋白的純化及其抗體的制備 |
| 主分類號(hào) | C07K1/14(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K1/14(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;C12P19/34(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中南大學(xué)腫瘤研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 李桂源;肖炳燚;曾朝陽(yáng);范松青;熊 煒;李小玲;沈守榮;周 鳴;李偉芳 |
| 地址 | 410078湖南省長(zhǎng)沙市湘雅路110號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國(guó)省代碼 | 湖南;43 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種鼻咽癌相關(guān)基因UBAP1編碼的蛋白的純化，采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法克隆UBAP1基因蛋白編碼序列，構(gòu)建該基因的融合表達(dá)質(zhì)粒，導(dǎo)入大腸桿菌JM109，IPTG誘導(dǎo)其在大腸桿菌中的表達(dá)，用GST融合蛋白純化試劑盒純化融合蛋白，本發(fā)明據(jù)原核表達(dá)載體pGEX-4T-2的GST閱讀框架設(shè)計(jì)引物，使UBAP1基因的編碼區(qū)閱讀框與GST的閱讀框架一致；其特征在于：以含UBAP1基因的質(zhì)粒為模板(0.1μg)，加入上述引物各10pmol進(jìn)行擴(kuò)增，回收PCR產(chǎn)物條帶；用BamH I、Xhol I分別雙酶切PCR回收產(chǎn)物及pGEX-4T-2載體，產(chǎn)生匹配的粘末端。小膠回收試劑回收線性的1.5kb的載體，UBAP1編碼區(qū)片段。將pGEX-4T-2載體與UBAP1基因連接，構(gòu)建成符合讀框的GST-UBAP1融合基因。用含融合基因的pGEX-4T-2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，小量制備質(zhì)粒DNA，BamH I和Xhol I酶切鑒定是否含插入片段，含插入片段的陽(yáng)性克隆質(zhì)粒DNA純化后用DNA自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。 |
| 摘要 | 一種鼻咽癌相關(guān)基因UBAP1編碼蛋白的純化及其抗體的制備，以獲得用于鼻咽癌特異性診斷的UBAP1基因診斷試劑盒，屬于蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域。本發(fā)明采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法克隆UBAP1基因蛋白編碼序列，構(gòu)建該基因的融合表達(dá)質(zhì)粒，導(dǎo)入BL21的大腸桿菌中，IPTG誘導(dǎo)其在大腸桿菌中的表達(dá)，采用谷胱甘肽親和層析系統(tǒng)純化融合蛋白，采用多點(diǎn)注射法制備兔多抗，骨髓瘤細(xì)胞融合法制備小鼠來源性的抗UBAP1單抗，進(jìn)而建立檢測(cè)UBAP1表達(dá)水平的免疫組化法以特異地診斷鼻咽癌。 |
| 國(guó)際公布 |
