| 公開(公告)號 | CN1289681C |
| 公開(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申請(專利)號 | CN03117329.2 |
| 申請日期 | 2003.02.20 |
| 專利名稱 | 乙型肝炎病毒siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建以及抗病毒治療應(yīng)用 |
| 主分類號 | C12N15/86(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/86(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 重慶醫(yī)科大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 黃愛龍;唐 霓;張秉強(qiáng);閆 歌 |
| 地址 | 400010重慶市渝中區(qū)醫(yī)學(xué)院路1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 重慶;85 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種用于構(gòu)建靶向乙型肝炎病毒的小干擾性RNA分子的表達(dá)載體，其特征在于該表達(dá)載體含有下述三對序列中的一對： (1)上游序列：5’-TCGAGCTCCAGTTCAGGAACAGTATTCGTACTGTTCCTGAACTGGAGTTTTT-3’ 下游序列：5’-CTAGAAAAACTCCAGTTCAGGAACAGTACGAATACTGTTCCTGAACTGGAGC-3’ (2)上游序列：5’-TCGAGTCACCATACTGCACTCAGGTTCGCCTGAGTGCAGTATGGTGATTTTT-3’ 下游序列：5’-CTAGAAAAATCACCATACTGCACTCAGGCGAACCTGAGTGCAGTATGGTGAC-3’ (3)上游序列：5’-TCGAGGCCAAGTCTGTACAGCATCTTCGGATGCTGTACAGACTTGGCTTTTT-3’ 下游序列：5’-CTAG AAA GCCAAGTCTGTACAGCATCCGAAGATGCTGTACAGACTTGGCC-3’。 |
| 摘要 | 乙型肝炎病毒siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建以及抗病毒治療應(yīng)用，本發(fā)明屬基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則，分別選擇HBV包膜蛋白(MS)編碼區(qū)69nt-87nt，聚合酶(P)編碼區(qū)708nt-726nt，核心蛋白(C)編碼區(qū)2052nt-2070nt的核苷酸序列，設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA序列，用BLAST軟件進(jìn)行同源分析證實(shí)為HBV高度保守序列后，化學(xué)合成單鏈寡核苷酸，體外經(jīng)退火形成雙鏈DNA，與真核表達(dá)載體pTZU6+1連接，酶切鑒定和序列測定分析表明成功構(gòu)建了三種靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表達(dá)載體。上述表達(dá)載體通過陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)與HBV真核表達(dá)載體pHBV共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2后，采用免疫熒光和Abbott實(shí)驗(yàn)均證實(shí)HBV siRNA具有較強(qiáng)抑制病毒復(fù)制和表達(dá)的作用。 |
| 國際公布 |
