| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1814805A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2006.08.09 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510110990.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.12.01 |
| 專利名稱 | H5、H7、H9亞型禽流感病毒的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 上海交通大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 張大兵;楊立桃;熊靜靜;潘愛(ài)虎;尹長(zhǎng)松 |
| 地址 | 200240上海市閔行區(qū)東川路800號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海交達(dá)專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王錫麟;王桂忠 |
| 國(guó)省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種H5、H7、H9亞型禽流感病毒的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟： (1)標(biāo)準(zhǔn)分子的構(gòu)建，在基因庫(kù)中檢索獲得禽流感病毒的保守基因，M基因以及H5、H7、H9亞型特異性基因，HA基因的序列，通過(guò)網(wǎng)上序列比對(duì)，確定禽流感病毒共有基因M以及H5、H7、H9亞型特異性基因HA的高度保守序列區(qū)，根據(jù)確定的保守序列區(qū)設(shè)計(jì)引物，利用基因克隆技術(shù)構(gòu)建同時(shí)含有禽流感病毒共有基因M以及H5、H7、H9亞型特異性基因HA的高度保守序列區(qū)的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子； (2)病毒特異性定量PCR引物和探針設(shè)計(jì)； (3)病毒樣本RNA的提�。� (4)對(duì)提取的樣本RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到樣本cDNA； (5)M基因定量PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化和建立，通過(guò)100-1000nM范圍內(nèi)各個(gè)濃度的引物和探針的組合，尋找所要求的反應(yīng)效率和曲線的反應(yīng)體系； (6)禽流感病毒亞型特異性定量PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化和建立，通過(guò)100-1000nM范圍內(nèi)各個(gè)濃度的引物和探針的組合，尋找所要求的反應(yīng)效率和曲線的反應(yīng)體系。 |
| 摘要 | 一種H5、H7、H9亞型禽流感病毒的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明包括如下步驟：標(biāo)準(zhǔn)分子的構(gòu)建；病毒特異性定量PCR引物和探針設(shè)計(jì)；病毒樣本RNA的提取；對(duì)提取的樣本RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到樣本cDNA；M基因定量PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化和建立；禽流感病毒亞型特異性定量PCR檢測(cè)方法的優(yōu)化和建立。本發(fā)明檢測(cè)靈敏度達(dá)到20個(gè)拷貝的病毒分子，對(duì)于單個(gè)樣本檢測(cè)時(shí)間為2個(gè)小時(shí)，操作簡(jiǎn)便，并且可以同時(shí)進(jìn)行大批量的樣本分析，較傳統(tǒng)的利用雞胚進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)的方法在靈敏度利檢測(cè)時(shí)間方面有了極大的提高，對(duì)于禽流感病毒的監(jiān)控、鑒定具有很大的幫助和很高的應(yīng)用前景。 |
| 國(guó)際公布 |
