| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1810957A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2006.08.02 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510041961.8 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.04.19 |
| 專利名稱 | 一種永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系及其建立方法 |
| 主分類號(hào) | C12N5/08(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 胡蘊(yùn)玉;滕 勇;白建萍;呂 榮;李 丹 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長(zhǎng)樂(lè)西路17號(hào)第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科研究所 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安慈源有限責(zé)任專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 鮑燕平 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系及其建立方法，原代人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于正常流產(chǎn)胎兒骨髓組織，其特征在于，該永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系體外培養(yǎng)能無(wú)限克隆增殖、且具有多向分化潛能；具體包括： 1)形態(tài)特征H.E染色，永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞完全貼壁后呈纖維樣或多角型，核多為圓形，細(xì)胞核質(zhì)比大，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器發(fā)達(dá)，屬生長(zhǎng)旺盛的成纖維樣細(xì)胞； 2)生長(zhǎng)特性細(xì)胞數(shù)較少時(shí)，可見(jiàn)典型的單克隆生長(zhǎng)方式；當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至75％融合時(shí)，呈纖維樣，生長(zhǎng)曲線表明，細(xì)胞接種1～2天生長(zhǎng)緩慢，3～5天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞倍增時(shí)間為40.08小時(shí)，從細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及1年以上擴(kuò)增細(xì)胞生長(zhǎng)情況看，該細(xì)胞系為永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系； 3)流式細(xì)胞分析特征永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CD29，CD44，CD106，不表達(dá)CD34，CD45，CD14，HLA-DR分子，從細(xì)胞表面分子標(biāo)志證實(shí)本研究獲得的永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系并非造血系細(xì)胞； 4)染色體核型分析傳至112代的人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞染色體數(shù)目為2n＝46，其中，中部著絲粒染色體有5對(duì)，臂比值為1.33±0.02～1.07±0.03；亞中部著絲粒染色體有7對(duì)，臂比值為3.18±0.03～1.45±0.07；端部著絲粒染色體有6對(duì)，小染色體有4對(duì)，性染色體1對(duì)，染色體核型正常； 5)生物學(xué)特征體外連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中，永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有克隆形成能力，無(wú)裸鼠致瘤性，在軟瓊脂內(nèi)不能生長(zhǎng)，血清依賴性無(wú)顯著降低，仍具有接觸抑制性，不具備轉(zhuǎn)化細(xì)胞或癌細(xì)胞的特征，是正常細(xì)胞； 6)成體干細(xì)胞特征永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞可以定向誘導(dǎo)分化為成骨、軟骨以及心肌樣細(xì)胞，具備成體干細(xì)胞的特性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于一種永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系及其建立方法，原代人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于正常流產(chǎn)胎兒骨髓組織，有限稀釋法進(jìn)行單細(xì)胞克隆培養(yǎng)純化原代細(xì)胞，通過(guò)轉(zhuǎn)染pCIneo-hTERT基因獲得永生化。該人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系體外培養(yǎng)能無(wú)限克隆增殖，但不具備轉(zhuǎn)化細(xì)胞或癌細(xì)胞的特征，在細(xì)胞生物學(xué)特征上是正常細(xì)胞；細(xì)胞可以定向誘導(dǎo)分化為成骨、軟骨以及心肌樣細(xì)胞，具有多向分化潛能，仍具備成體干細(xì)胞的特性�？梢栽谏锕こ填I(lǐng)域得到應(yīng)用。這種永生化人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系及其建立方法，為研究人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)行為提供標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系，為組織工程基礎(chǔ)研究提供平臺(tái)，為臨床應(yīng)用提供足量種子細(xì)胞，并為建立人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞系提供一種有效、可靠的方法。 |
| 國(guó)際公布 |
