公開(公告)號
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CN1800215A
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公開(公告)日
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2006.07.12
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申請(專利)號
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CN200510032327.8
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申請日期
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2005.11.01
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專利名稱
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一種預防和治療日本血吸蟲感染的相關基因和蛋白質(zhì)及其用途
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主分類號
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C07K14/765(2006.01)I
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分類號
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C07K14/765(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/86(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/74(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61K38/38(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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中南大學
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發(fā)明(設計)人
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胡維新;鄔國軍;秦志強
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地址
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410078湖南省長沙市開福區(qū)湘雅路110號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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代理人
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國省代碼
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湖南;43
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主權項
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東方田鼠血清白蛋白系利用親和層析法、聚丙烯酰氨凝膠電泳、透析、冷凍干燥,從東方田鼠長江亞種和寧夏指名亞種血清中分離得到。東方田鼠白蛋白對在體外培養(yǎng)的日本血吸蟲童蟲有明顯的殺滅作用,對在體內(nèi)接種血吸蟲尾蚴的小白鼠有明顯的預防和治療作用。 將成年東方田鼠用乙醚麻醉,眼框取血。血液收集于試管中,冰箱4℃過夜,使血液凝固。血液凝固后,3000轉(zhuǎn)/每分鐘,離心5分鐘,收集血清。 東方田鼠血清用緩沖液I(0.05MKH2PO4,pH7.0)按1∶1稀釋,經(jīng)10000rpm離心去除不溶性物質(zhì)后,上樣于藍色瓊脂糖凝膠FF親和層析柱頂部。層析柱用緩沖液I洗脫,以去除未結合蛋白質(zhì)。隨后用緩沖液II(0.05MKH2PO4,1.5MKCl,pH7.0)對血清白蛋白進行洗脫,收集洗脫液。透析袋(透析分子量8000~14000kDa)用緩沖液I透析平衡24小時(其間換液至少3次)。將含有血清白蛋白的洗脫液置于透析袋內(nèi),4℃對水充分透析去鹽3天(其間換液至少6次),真空冷凍干燥。用12%SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳,對純化的白蛋白進行純度鑒定。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種殺滅日本血吸蟲童蟲及預防、治療日本血吸蟲感染的蛋白質(zhì)序列和相應基因序列及其用途。該蛋白質(zhì)系利用親和層析法、聚丙烯酰氨凝膠電泳、透析、冷凍干燥和蛋白質(zhì)氨基端測序,從東方田鼠血清中分離得到血清白蛋白。利用聚合酶鏈式反應技術,獲得東方田鼠血清白蛋白基因序列。將該基因以及修飾后的突變體插入真核表達載體,導入動物體內(nèi),可用于日本血吸蟲感染的基因預防和治療。可利用基因工程技術,生產(chǎn)東方田鼠血清白蛋白及其突變體,用于血吸蟲病的預防和治療。通過建立轉(zhuǎn)基因動物,使疫區(qū)動物對日本血吸蟲產(chǎn)生永久性抗性,阻斷日本血吸蟲的傳播和血吸蟲病的蔓延。
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國際公布
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