|
公開(公告)號(hào)
|
CN1793373A
|
|
公開(公告)日
|
2006.06.28
|
|
申請(qǐng)(專利)號(hào)
|
CN200510057367.8
|
|
申請(qǐng)日期
|
2005.11.04
|
|
專利名稱
|
基因工程制備人白細(xì)胞介素24的方法及其表達(dá)載體和工程菌
|
|
主分類號(hào)
|
C12N15/63(2006.01)I
|
|
分類號(hào)
|
C12N15/63(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N
|
|
分案原申請(qǐng)?zhí)? |
|
|
優(yōu)先權(quán)
|
|
|
申請(qǐng)(專利權(quán))人
|
中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
|
|
發(fā)明(設(shè)計(jì))人
|
鄒全明;楊 珺;張衛(wèi)軍
|
|
地址
|
400038重慶市沙坪壩區(qū)高灘巖正街30號(hào)
|
|
頒證日
|
|
|
國(guó)際申請(qǐng)
|
|
|
進(jìn)入國(guó)家日期
|
|
|
專利代理機(jī)構(gòu)
|
重慶華科專利事務(wù)所
|
|
代理人
|
康海燕
|
|
國(guó)省代碼
|
重慶;85
|
|
主權(quán)項(xiàng)
|
一種基因工程人白細(xì)胞介素24的表達(dá)載體，其特征在于，該載體為含有人白細(xì)胞介素24基因序列hIL-24或人白細(xì)胞介素24基因突變序列hsIL-24的質(zhì)粒載體pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24編碼序列位于pET32a(+)載體上Kpn1和BamH1酶切位點(diǎn)之間，該載體為pET32a(+)-hIL-24或pET32a(+)-hsIL-24；克隆hIL-24或hsIL-24基因的引物為： P15’-GGTACCGACGACGACGACAAGGCCCAGGGCCAAGAATT(Kpn1) P25’-GGATCCTTACAGAGCTTGTAGAATTTCTG(BamHI) 為避免在N端引入Ala和Met兩個(gè)多余的氨基酸，在設(shè)計(jì)引物時(shí)將腸激酶識(shí)別位點(diǎn)的編碼堿基，即加黑斜體部分，加入到上游引物中。
|
|
摘要
|
本發(fā)明提供一種高效地制備具有一定生物活性的基因工程人白介素24的方法，及其表達(dá)載體和工程菌。本發(fā)明選用融合表達(dá)載體來(lái)表達(dá)hIL-24或hsIL-24蛋白，所述的表達(dá)載體為含有人白細(xì)胞介素24基因序列(IL-24)或人白細(xì)胞介素24基因突變序列(sIL-24)的質(zhì)粒載體pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24編碼序列位于pET32a(+)載體上Kpn1和BamH1酶切位點(diǎn)之間。所述的基因工程菌是大腸桿菌，并被本發(fā)明所述的表達(dá)載體所轉(zhuǎn)化，是pET32a(+)-hIL-24/BL21或pET32a(+)-hsIL-24/BL21。本發(fā)明的制備工藝中提供了全套的溶解、復(fù)性、消化以及純化的工藝，使目的蛋白的表達(dá)量能夠達(dá)到30％，復(fù)性得率大于50％，IL-24的純度大于95％，且完全適用于工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。
|
|
國(guó)際公布
|
|
