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抗腫瘤表面抗原p185單抗嵌合抗體及其制備方法

公開(公告)號 CN1238381C  
公開(公告)日 2006.01.25  
申請(專利)號 CN200310106256.2  
申請日期 2003.11.08  
專利名稱 抗腫瘤表面抗原p185單抗嵌合抗體及其制備方法  
主分類號 C07K16/18(2006.01)I  
分類號 C07K16/18(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 劉 兢;程聯(lián)勝  
地址 230026安徽省合肥市金寨路96號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 合肥華信專利商標(biāo)事務(wù)所  
代理人 余成俊  
國省代碼 安徽;34  
主權(quán)項(xiàng) 一種抗腫瘤表面抗原p185單鏈抗體-人scFv-Fc嵌合抗體,分子中包括兩個(gè)由單鏈抗體組成的兩個(gè)抗原結(jié)合區(qū)和兩條人抗體IgG1分子恒定區(qū)通過三對二硫鍵連接在一起的Fc片段;其特征在于:1)該嵌合抗體分子僅由兩條相同的重組單鏈組成,每條重組單鏈有一個(gè)抗原結(jié)合區(qū),它是由重鏈和輕鏈可變區(qū)共價(jià)連接在一起,構(gòu)成識別抗原的單鏈抗體,命名為A21scFv;2)該單鏈抗體A21scFv的基酸序列為:VLDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYLinkerPWTFGGGTKLEIKRGGGGSGVHGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSS其中的黑體部分為重鏈和輕鏈的抗原結(jié)合區(qū),下劃線部分為重鏈和輕鏈可變區(qū)之間的連接區(qū);每條單鏈scFv片段與人抗體IgG1的Fc片段之間是通過肽鍵共價(jià)連接構(gòu)成了一條scFv-Fc嵌合單鏈,嵌合單鏈中scFv與Fc的連接區(qū)有一段稱作絞鏈區(qū)的肽段部分含有三對共價(jià)的鏈間二硫鍵;即這個(gè)分子是由兩條嵌合單鏈通過三對鏈間二硫鍵連接組成的同二聚體的嵌合抗體分子。  
摘要 本發(fā)明針對腫瘤表面抗原p185的單鏈抗體-人scFv-Fc嵌合抗體及其制備方法,特征是采用表面表位包埋法免疫后制備的雜交瘤細(xì)胞株,以單鏈嵌合抗體基因的形式轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO,采用pEE14作為重組抗體的載體,用它攜帶基因轉(zhuǎn)染到GS低表達(dá)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO中,將高表達(dá)重組抗體的CHO細(xì)胞株篩選出來;本發(fā)明的嵌合抗體分子僅由兩條相同的重組單鏈組成,每條重組單鏈有一的抗原結(jié)合區(qū),由重鏈和輕鏈可變區(qū)共價(jià)連接在一起,構(gòu)成了識別抗原的單鏈抗體;由于去除了輕鏈恒定區(qū)和重鏈恒定區(qū)的CH1結(jié)構(gòu)域,比完整抗體的分子量小了近三分之一,既更容易透過血管系屏障滲透進(jìn)實(shí)體瘤的內(nèi)部,又不像小的蛋白多肽藥物那樣容易很快被降解,從而能更好地發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用。  
國際公布  
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