| 公開(公告)號 | CN1616653A |
| 公開(公告)日 | 2005.05.18 |
| 申請(專利)號 | CN200410092831.2 |
| 申請日期 | 2004.11.12 |
| 專利名稱 | 篩選轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性單克隆方法 |
| 主分類號 | C12N5/10 |
| 分類號 | C12N5/10;C12Q1/04 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.9.20 CN 200410083047.5 |
| 申請(專利權(quán))人 | 新疆金牛生物股份有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王亮;朱海;呂自力;劉婷婷;帥志強(qiáng);彭濤 |
| 地址 | 830026新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)校院路15號金牛公司科學(xué)院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 烏魯木齊合縱專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 湯建武 |
| 國省代碼 | 新疆;65 |
| 主權(quán)項 | 一種篩選轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性單克隆方法，其特征在于按下述步驟進(jìn)行：第一步，在培養(yǎng)液中對需要轉(zhuǎn)基因的動物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，待其動物細(xì)胞聚合至40％至80％后，進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染；第二步，在基因轉(zhuǎn)染后進(jìn)行1天至7天的動物細(xì)胞生長恢復(fù)，然后用能致死非基因轉(zhuǎn)染動物細(xì)胞的濃度的新霉素進(jìn)行5天至20天篩選；第三步，在第二步致死性篩選后，使用轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞維持生長濃度的新霉素，再加入離心收集的該動物細(xì)胞對數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液，在此條件下，在培養(yǎng)液中進(jìn)行2天至14天的動物細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增；第四步，當(dāng)?shù)谌街械年栃赞D(zhuǎn)基因動物細(xì)胞生長形成克隆后，用細(xì)胞刮刀刮除正常細(xì)胞，保留轉(zhuǎn)基因陽性動物細(xì)胞克��；第五步，挑選和標(biāo)記選定的轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性單克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定點消化該單克隆細(xì)胞并將消化后的陽性單克隆細(xì)胞迅速置入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)擴(kuò)增，培養(yǎng)擴(kuò)增至50％--80％的細(xì)胞聚合，用0.125％至0.25％濃度的胰酶或EDTA-胰酶消化和懸浮上述所培養(yǎng)擴(kuò)增的陽性轉(zhuǎn)基因單克隆動物細(xì)胞，加入培養(yǎng)液和致死非基因轉(zhuǎn)染動物細(xì)胞的濃度的新霉素，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，在致死非基因轉(zhuǎn)染動物細(xì)胞的濃度的新霉素和胰酶或EDTA-胰酶作用下，在培養(yǎng)液中致死殘留的非基因轉(zhuǎn)染動物細(xì)胞；第六步，將第五步所得到陽性單克隆動物細(xì)胞再植入新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)，在陽性轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞維持生長的濃度的新霉素條件下，再加入離心收集的該細(xì)胞對數(shù)生長期含有生長因子培養(yǎng)液的條件下，即可得到大量的純化的轉(zhuǎn)基因陽性單克隆動物細(xì)胞。 |
| 摘要 | 一種篩選轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性單克隆方法，其按下述步驟進(jìn)行：第一步，對需要轉(zhuǎn)基因的動物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染；第二步，用能致死非基因轉(zhuǎn)染動物細(xì)胞的濃度的新霉素進(jìn)行篩選；第三步，轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性克隆的培養(yǎng)擴(kuò)增；第四步，刮除非基因轉(zhuǎn)染動物細(xì)胞，保留轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性克��；第五步，挑選轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性單克隆并培養(yǎng)擴(kuò)增，致死殘留的非基因轉(zhuǎn)染動物細(xì)胞；第六步，進(jìn)一步培養(yǎng)擴(kuò)增得到大量的轉(zhuǎn)基因動物陽性單克隆細(xì)胞。本發(fā)明的特點：省時省工，效率高，并且大大降低了篩選轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性單克隆的成本。同時該方法適用于商業(yè)上具有經(jīng)濟(jì)價值的轉(zhuǎn)基因動物細(xì)胞陽性單克隆的篩選，是制作轉(zhuǎn)基因動物的必要手段之一。 |
| 國際公布 |
