| 公開(公告)號 | CN1195055C |
| 公開(公告)日 | 2005.03.30 |
| 申請(專利)號 | CN01131190.8 |
| 申請日期 | 2001.09.06 |
| 專利名稱 | 從胎盤組織中提取造血干細(xì)胞用于建立造血干細(xì)胞庫的新方法 |
| 主分類號 | C12N5/08 |
| 分類號 | C12N5/08;A61K35/50;A61P7/06 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 周勝利;胡玉蘭 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 周勝利;宋劍秋;胡玉蘭 |
| 地址 | 100085 北京市海淀區(qū)清林園4號樓2單元601號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種從胎盤組織中提取造血干細(xì)胞用于建立造血干細(xì)胞庫的方法，所述方法分為收集步驟、檢測步驟、提取步驟、濃縮純化步驟的過程，其分別為：(1)收集步驟：收集臍帶血及胎盤并附著條形碼標(biāo)簽且存放于4℃冰箱，不超過24小時；(2)檢測步驟：對所冷凍的臍帶血及胎盤提取樣本并進(jìn)行如下檢測，肝炎病毒及相應(yīng)抗體、性病檢測、愛滋病(AIDs)毒抗體檢測、遺傳性溶血性疾病、有核白細(xì)胞及單個核細(xì)胞計數(shù)、造血干/祖細(xì)胞定量檢測(CD34)、組織配型(HLA)、造血干/祖細(xì)胞定性檢測(CFU-GM)的檢測；(3)提取步驟：對胎盤組織在無菌的環(huán)境和條件下，用無菌生理鹽水清洗胎盤，清洗掉所有的血凝塊及積血，采用消毒劑殺滅任何可能的細(xì)菌污染；再次應(yīng)用磷酸緩沖液(PH7.4)，低分子右旋糖酐及細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM)按順序清洗；將經(jīng)選擇后的臍帶血漿、DMEM培養(yǎng)液和胎盤細(xì)胞共同混和過夜；剪除臍帶和表層的胎盤膜，應(yīng)用撕裂，研磨和DMEM沖洗的方法將胎盤細(xì)胞收集到50毫升的離心管內(nèi)，在離心機(jī)內(nèi)以1000rpm，5分鐘，4℃離心，棄去上清液；采用16G、18G和20G的針頭過濾，將胎盤細(xì)胞制成單個細(xì)胞；將制備后的胎盤細(xì)胞做以下檢測：細(xì)胞和霉菌培養(yǎng)，有核白細(xì)胞及單個核細(xì)胞計數(shù)，造血干/祖細(xì)胞定量檢測(CD34)，造血干/祖細(xì)胞定性檢測(CFU-GM)，造血干/祖細(xì)胞的活性(臺盼蘭染色)；將檢測后的胎盤組織的胎盤細(xì)胞制取的單個核細(xì)胞以1×108/ml和DMSO混合，且以10％的DMSO和低分子右旋糖酐濃度，在液氮低度降溫到零下80℃，然后轉(zhuǎn)移到液氮(-186℃)液相中深低溫保存；(4)濃縮純化步驟：將提取的胎盤組織細(xì)胞和羥乙基淀粉按1∶6比例混合；在離心機(jī)中以500g離心10分鐘，去掉紅細(xì)胞；和淋巴細(xì)胞分離液按1∶4的比例混合；在離心機(jī)中以1000g離心30分鐘，去掉殘存紅細(xì)胞以及成熟的粒細(xì)胞；收集和洗滌各個不同發(fā)育階段的造血干細(xì)胞群；建立干細(xì)胞庫。 |
| 摘要 | 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供了從健康產(chǎn)婦的胎盤中提取干細(xì)胞建立造血干細(xì)胞庫的方法。本發(fā)明變廢為寶，采用機(jī)械、酶消化及單克隆抗體-磁珠法從胎盤中提取、濃縮和純化活性好、濃度高、數(shù)量多的血液干細(xì)胞。經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞標(biāo)記檢測和動物實驗表明，胎盤中提取的干細(xì)胞能加強(qiáng)造血干細(xì)胞移植的短期和長期長活。從而可用于凍存建立胎盤和臍帶血造血干細(xì)胞庫，在胎盤供者本人(自體)或其他人(異體)患各種造血干細(xì)胞移植適應(yīng)癥時應(yīng)用，也可結(jié)合著各種細(xì)胞生長因子在臨床上開展細(xì)胞修復(fù)。本發(fā)明為臨床提供了造血干細(xì)胞和干細(xì)胞的新來源，促進(jìn)了細(xì)胞移植和組織修復(fù)的發(fā)展。 |
| 國際公布 |
