| 公開(公告)號(hào) | CN1590559A |
| 公開(公告)日 | 2005.03.09 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03152881.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.09.01 |
| 專利名稱 | 一種單分子dsDNA微陣列芯片制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 王進(jìn)科;李同祥;陸祖宏 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王進(jìn)科;李同祥;陸祖宏 |
| 地址 | 210096江蘇省南京市四牌樓2號(hào)東南大學(xué)吳健雄實(shí)驗(yàn)室 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國(guó)省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種制備單分子雙鏈脫氧核糖核酸(dsDNA)微陣列芯片的新方法，包括步驟：(1)、固相化學(xué)合成兩種單鏈寡核苷酸片段，一種為靶寡核苷酸，其5′端為兩段反向堿基互補(bǔ)序列，3′端為通用寡核苷酸互補(bǔ)序列；另一種為通用寡核苷酸，其3′端為羥基，5′端為化學(xué)修飾基團(tuán)；(2)、在液相反應(yīng)體系中將該通用寡核苷酸與靶寡核苷酸復(fù)性；(3)、兩寡核苷酸復(fù)性產(chǎn)物點(diǎn)樣固定到固相支持物表面，形成寡核苷酸微陣列；(4)、寡核苷酸微陣列在片核酸聚合酶延伸，形成雙分子dsDNA微陣列；(5)、雙分子dsDNA微陣列變性，形成單鏈脫氧核糖核酸(ssDNA)微陣列；(6)、ssDNA微陣列復(fù)性，單鏈3′端形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)；(7)、復(fù)性后ssDNA微陣列在片核酸聚合酶延伸，形成單分子dsDNA微陣列。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提出一種新的在固相支持物表面制備單分子(unimolecular)雙鏈脫氧核糖核酸(double-stranded DNA，dsDNA)微陣列(microarray)的方法。該方法首先用固相化學(xué)合成兩條寡核苷酸，一條為靶寡核苷酸(target oligonucleotide)，另一條為通用寡核苷酸(universaloligonucleotide)；其中靶寡核苷酸從5′端到3′端含有如下構(gòu)件：反向互補(bǔ)序列、蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)和通用寡核苷酸互補(bǔ)序列；通用寡核苷酸的5′端修飾特定化學(xué)基團(tuán)，以便將DNA連接固定到固相支持物表面，3′端為羥基。芯片制備時(shí)，首先將靶寡核苷酸和通用寡核苷酸復(fù)性，將復(fù)性產(chǎn)物點(diǎn)印連接到固相支持物表面，制成寡核凸酸微陣列；對(duì)寡核苷酸微陣列進(jìn)行在片(on-chip)DNA聚合酶延伸反應(yīng)，使寡核苷酸微陣列成為雙分子(bimolecular)dsDNA微陣列；將微陣列變性處理，使其成為單鏈DNA(single-stranded DNA，ssDNA)微陣列；將ssDNA微陣列進(jìn)行DNA復(fù)性處理，使單鏈DNA自由3′端形成發(fā)卡(hairpin)結(jié)構(gòu)；最后對(duì)復(fù)性的ssDNA微陣列再進(jìn)行在片DNA聚合酶延伸反應(yīng)，使ssDNA微陣列成為單分子(unimolecular)dsDNA微陣列。本發(fā)明制備的單分子dsDNA微陣列芯片，在基礎(chǔ)分子生物學(xué)研究，特別是基因表達(dá)調(diào)控研究及生物醫(yī)學(xué)研究，如DNA結(jié)合蛋白相關(guān)疾病診斷、藥物作用機(jī)理和藥物性分子篩選研究中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。 |
| 國(guó)際公布 |
