| 公開(公告)號 | CN1177051C |
| 公開(公告)日 | 2004.11.24 |
| 申請(專利)號 | CN02136180.0 |
| 申請日期 | 2002.07.25 |
| 專利名稱 | 一種重組胸腺素α1的制備方法 |
| 主分類號 | C12N15/16 |
| 分類號 | C12N15/16;C07K14/575 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 郭葆玉;苗紅;章杰;袁鵬群 |
| 地址 | 200433 上海市楊浦區(qū)翔殷路800號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 衷誠宣 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種重組胸腺素α1的制備方法，包括：(1)融合表達載體的構(gòu)建；(2)大腸桿菌工程菌的發(fā)酵；(3)重組胸腺素α1的制備與純化；其特征在于所構(gòu)建的融合表達載體為pGEX-4T-1/Tα1，所用的上游引物為5′-GGGGATCCGACGCAGCCGTAGAC-3′，下游引物為5′GGGAATTCTTATTTTCTGCCTCTTCCAC-3′，模板為人胎盤cDNA，所得的胸腺素α1的氨基酸序列為Gly Ser Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser GluIle Thr Thr Lys Asp Leu Lys Glu Lys Lys Glu Val Val GluGlu Ala Glu Asn。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物工程技術(shù)領(lǐng)域，是一種重組胸腺素α1即Gly-Tα1及其制備方法。天然胸腺素α1都采用固相合成法全合成，不僅成本高，而且易污染環(huán)境。本發(fā)明采用基因工程方法，以5′-GGGGATCCGACGCAGCCGTAGAC-3′為上游引物、5′-GGGAATTCTTATTTTCTGCCTCTTCCAC-3′為下游引物，以人胎盤cDNA為模板進行PCR，擴增出目的基因片段，通過EcoRI/BamHI雙酶切將目的基因定向克隆到質(zhì)粒pGEX-4T-1上構(gòu)建融合表達載體pGEX-4T-1/Tα1。制備的工程菌可表達出谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶-胸腺素α1融合蛋白，親和層析純化融合蛋白，凝血酶酶切釋放出Gly-Tα1，最后通過親和層析和離子交換層析純化出Gly-Tα1。經(jīng)試驗，Gly-Tα1的生物學(xué)活性不亞于合成的胸腺素α1。本發(fā)明制備方法簡單，成本低廉，且不會造成環(huán)境污染。 |
| 國際公布 |
