| 公開(公告)號 | CN1546671A |
| 公開(公告)日 | 2004.11.17 |
| 申請(專利)號 | CN200310115938.X |
| 申請日期 | 2003.12.16 |
| 專利名稱 | 重組人內(nèi)皮抑素在大腸桿菌中的高效表達技術(shù) |
| 主分類號 | C12N15/70 |
| 分類號 | C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12P21/02;//(C12N15/70,C12R1∶19) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學院長春應(yīng)用化學研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王群 |
| 地址 | 130022吉林省長春市人民大街5625號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項 | 一種重組人內(nèi)皮抑素在大腸桿菌中的高效表達技術(shù)，將重組質(zhì)粒pBendo轉(zhuǎn)化表達型宿主菌E.coliBL21(DE3)中，篩選出陽性重組菌E.coliBL21-Endo，接種于2mL、含60～90μg/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)液中，在細菌培養(yǎng)箱中，35～38℃，180～220rpm振蕩培養(yǎng)12～16h，然后將菌液接種于200mL、含60～90μg/mLKan的LB培養(yǎng)液中，36～38℃，200～250rpm振蕩培養(yǎng)2～3h，使菌液OD600nm在0.4～0.6，向菌液中加入終濃度為0.8～1.0mmol/L的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，在36～37℃下，180～200rpm繼續(xù)振蕩培養(yǎng)3～5h誘導內(nèi)皮抑素的表達，表達量達到菌體總蛋白的38％。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于重組人內(nèi)皮抑素在大腸桿菌中高效表達的技術(shù)領(lǐng)域。將人內(nèi)皮抑素基因其插入原核表達載體pET28b中構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pBendo，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)中，篩選出陽性重組菌E.coli BL21-Endo，在含卡那霉素的LB培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)，使菌液OD600nm在0.4～0.6，加入終濃度為0.8～1.0m mol/L的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)誘導內(nèi)皮抑素的表達。重組內(nèi)皮抑素蛋白表達量提高到菌體總蛋白的38％。 |
| 國際公布 |
