| 公開(公告)號(hào) | CN1171640C |
| 公開(公告)日 | 2004.10.20 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02114462.1 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.03.08 |
| 專利名稱 | 肝癌超抗原免疫基因治療劑的制備方法 |
| 主分類號(hào) | A61K48/00 |
| 分類號(hào) | A61K48/00 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 隋延仿 |
| 地址 | 710032 陜西省西安市長(zhǎng)樂西路17號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 陳翠蘭 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 肝癌超抗原免疫基因治療劑的制備方法，其特征在于：從甲胎蛋白AFP高分泌的肝癌細(xì)胞中分離細(xì)胞基因組總DNA，設(shè)計(jì)特異性引物，通過PCR方法擴(kuò)增AFP啟動(dòng)子和順式增強(qiáng)子序列；分別從腸葡萄球菌場(chǎng)毒素A標(biāo)準(zhǔn)菌株FRI100基因組中通過PCR擴(kuò)增SEA基因全序列和蛋白編碼序列，定點(diǎn)突變SEA基因位點(diǎn)，同時(shí)從人B細(xì)胞通過反轉(zhuǎn)錄PCR分別擴(kuò)增共刺激分子B7.1基因編碼胞外區(qū)序列B7.1exc和跨膜區(qū)序列B7.1tm；將上述片段克隆至Clontech公司生產(chǎn)的逆轉(zhuǎn)錄病毒真核表達(dá)載體pLXSN中，分別構(gòu)建以AFP啟動(dòng)子和增強(qiáng)子為調(diào)控元件的B7.1exc-SEA-B7.1tm和SEA-B7.1tm目的基因逆轉(zhuǎn)錄真核表達(dá)載體；將目的基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體在病毒包裝細(xì)胞系PA317、φ2中進(jìn)行包裝；以包裝好的缺陷病毒顆粒感染人肝癌細(xì)胞，表達(dá)出SEA-B7.1融合蛋白；以視黃素、地塞米松、雌激素等藥物對(duì)SEA-B7.1的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，同時(shí)通過檢測(cè)AFP水平來判斷治療效果；利用AFP特異性調(diào)控序列調(diào)控目的基因B7.1exc-SEA-B7.1tm和SEA-B7.1tm的表達(dá)，通過設(shè)計(jì)特異性引物：5’CGCAACTTAGGGACAAGT 3’TGTTATTGGCAGTGG和5’GCTGGCTTCACAGACTTATG 3’GGAGACCAGTTAGG AAGT，通過PCR方法擴(kuò)增AFP啟動(dòng)子和順式增強(qiáng)子序列，其序列如下：AFP啟動(dòng)子序列GCAACTTAGGGACAAGTCATCTCTTTGAATATTCTGTAGTTTGAGGAGAATATTTGTTATATTTGCAAAATAAAATAAGTTTGCAAGTTTTTTTTTTCTGCCCCAAAGAGCTCTGTGTCCTTGAACATAAAATACAAATAACCGCTATGCTGTTAATTATTGGCAAATGTCCCATTTTCAACCTAAGGAAATACCATAAAGTAACAGATATACCAACAAAAGGTTACTAGTTAACAGGCATTGCCTGAAAAGAGTATAAAAGAATTTCAGCATGATTTTCCATATTGTGCTTCCACCACTGCCAATAACAAFP增強(qiáng)子序列GCTGGCTTCACAGACTTATGAAAAAGTAAACGGAATCAGAATTACATCAATGCAAAAGCATTGCTGTGAACTCTGTACTTAGGACTAAACTTTGAGCAATAACACATATAGATTGAGGATTGTTTGCTGTTAGTATACAAACTCTGGTTCAAAGCTCCTCTTTATTGCTTGTCTTGGAAAATTTGCTGTTCTTCATGGTTTCTCTTTTCACTGCTATCTATTTTTCTCAACCACTCACATGGCTACAATAACTGTCTGCAAGCTTATGATTCCCAAATATCTATCTCTAGCCTCAATCTTGTTCCAGAAGATAAAAAGTAGTATTCAAATGCACATCAACGTCTCCACTTGGAGGGCTTAAAGACGTTTCAACATACAAACCGGGGAGTTTTGCCTGGAATGTTTCCTAAAATGTGTCCTGTAGCACATAGGGTCCTCTTGTTCCTTAAAATCTAATTACTTTTAGCCCAGTGCTCATCCCACCTATGGGGAGATGAGAGTGAAAAGGGAGCCTGATTAATAATTACACTAAGTCAATAGGCATAGAGCCAGGACTGTTTGGGTAAACTGGTCACTTTATCTTAAACTAAATATATCCAAAACTGAACATGTACTTAGTTACTAAGTCTTTGACTTTATCTCATTCATACCACTCAGCTTTATCCAGGCCACTTATTTGACAGTATTATTGCGAAAACTTCCTAACTGGTCTCC，其特點(diǎn)是將所獲得的調(diào)控序列置于目的基因上游，特異性調(diào)控目的基因的表達(dá)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種涉及基因工程技術(shù)的肝細(xì)胞癌(肝癌)超抗原免疫基因治療劑的制備方法，制備肝癌特異性啟動(dòng)子和增強(qiáng)子調(diào)控序列介導(dǎo)的超抗原分子和共刺激分子在肝癌細(xì)胞進(jìn)行靶向表達(dá)的治療劑，特異性增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的免疫原性和與免疫效應(yīng)細(xì)胞的識(shí)別作用。將此治療劑通過介入方式送到癌區(qū)，可有效殺傷肝癌細(xì)胞，治療時(shí)可利用相關(guān)藥物調(diào)控肝癌特異性啟動(dòng)子和增強(qiáng)子的活性來調(diào)節(jié)超抗原分子和共刺激分子的表達(dá)，并通過肝癌特異性啟動(dòng)子和增強(qiáng)子調(diào)控的自身產(chǎn)物水平判斷治療效果。同時(shí)利用肝癌特異性抗原、超抗原分子和共刺激分子在體外誘導(dǎo)自身T淋巴細(xì)胞進(jìn)行過繼免疫治療，輔助癌區(qū)免疫治療，以增強(qiáng)療效、治療轉(zhuǎn)移病灶和預(yù)防復(fù)發(fā)。本發(fā)明的肝癌細(xì)胞超抗原免疫基因治療劑具有以下特點(diǎn)：(1)安全性；(2)靶向性；(3)可控性；(4)滅癌高效性，是一種很有前景的肝癌免疫基因治療劑。 |
| 國(guó)際公布 |
