| 公開(公告)號(hào) | CN1161461C |
| 公開(公告)日 | 2004.08.11 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN01123246.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2001.07.20 |
| 專利名稱 | 堿性磷酸酶在酵母中的表達(dá) |
| 主分類號(hào) | C12N9/16 |
| 分類號(hào) | C12N9/16;C12N15/63;C12N15/81;C12N1/16;//(C12N9/16,C12R1:84,1:78) |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2000.7.25 DE 10036491.8 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 霍夫曼-拉羅奇有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | R·米勒;J·P·塔爾霍菲;F·蓋佩 |
| 地址 | 瑞士巴塞爾 |
| 頒證日 | 2004.08.11 |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 張廣育;姜建成 |
| 國(guó)省代碼 | 瑞士;CH |
| 主權(quán)項(xiàng) | 在酵母細(xì)胞中生產(chǎn)真核堿性磷酸酶的方法，包括以下步驟：a)克隆一種為在酵母中表達(dá)而進(jìn)行了密碼子優(yōu)化的基因序列進(jìn)入不同的載體，該基因序列編碼比活性高于3000U/mg的真核堿性磷酸酶，b)轉(zhuǎn)化酵母，c)表達(dá)，以及d)純化堿性磷酸酶，其中-第一載體具有針對(duì)第一選擇標(biāo)記的抗性基因，-通過在含有低濃度第一選擇標(biāo)記的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)來選擇抗性基因和基因序列已經(jīng)整合到基因組的轉(zhuǎn)化子，-通過多重轉(zhuǎn)化增加基因拷貝數(shù)，其中多重轉(zhuǎn)化子通過在選擇壓力增加的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)來選擇，-加入具有針對(duì)第二選擇標(biāo)記的抗性基因的第二載體，-通過第二載體的多重轉(zhuǎn)化增加基因拷貝數(shù)，其中多重轉(zhuǎn)化子通過在選擇壓力增加的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)來選擇，-選擇已經(jīng)以穩(wěn)定方式整合了幾個(gè)拷貝的基因序列和選擇標(biāo)記抗性基因的克隆。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及在酵母細(xì)胞中重組生產(chǎn)和表達(dá)真核堿性磷酸酶的方法，其中使用編碼比活性高于3000U/mg的高活性真核堿性磷酸酶的DNA。本發(fā)明還涉及將相應(yīng)核酸序列插入在甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母菌株中表達(dá)的載體中的方法，以及合適的載體和宿主菌株。 |
| 國(guó)際公布 |
