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同源重組中的正負(fù)篩選

公開(公告)號(hào) CN1146666C  
公開(公告)日 2004.04.21  
申請(專利)號(hào) CN98810394.X  
申請日期 1998.10.20  
專利名稱 同源重組中的正負(fù)篩選  
主分類號(hào) C12N15/90  
分類號(hào) C12N15/90;C12N15/65;C12N15/82  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1997.10.20 EP 97118175.5  
申請(專利權(quán))人 羅切診斷學(xué)有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 J·奧爾;R·斯賓杰;K·霍諾德  
地址 德國曼海姆  
頒證日 2004.04.21  
國際申請 PCT/EP1998/006616 1998.10.20  
進(jìn)入國家日期 2000.04.20  
專利代理機(jī)構(gòu) 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所  
代理人 樊衛(wèi)民  
國省代碼 德國;DE  
主權(quán)項(xiàng) 一種通過同源重組將異源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞的方法,其中宿主細(xì)胞用含有兩個(gè)側(cè)翼核苷酸序列的重組載體轉(zhuǎn)染,所述側(cè)翼核苷酸序列與宿主細(xì)胞基因組中的目標(biāo)序列同源,且編碼正選擇標(biāo)記的核苷酸位于兩個(gè)側(cè)翼核苷酸序列內(nèi)側(cè),編碼負(fù)選擇標(biāo)記的核苷酸序列位于兩個(gè)側(cè)翼核苷酸序列外側(cè),選擇標(biāo)記基因與在宿主細(xì)胞中有活性的表達(dá)控制序列有效連接,其中使用一種或多種編碼位于細(xì)胞表面多肽的核苷酸序列作為負(fù)選擇標(biāo)記,使得在載體通過同源重組整合入細(xì)胞基因組后負(fù)選擇基因不表達(dá),在載體通過隨機(jī)整合入細(xì)胞基因組后負(fù)選擇基因表達(dá),且其基因產(chǎn)物出現(xiàn)在細(xì)胞表面。  
摘要 本發(fā)明涉及一種通過同源重組向目標(biāo)細(xì)胞基因組中導(dǎo)入異源DNA的方法。本發(fā)明還涉及適于同源重組的DNA構(gòu)建體。  
國際公布 WO99/20780 德 1999.4.29  
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