| 公開(公告)號 | CN1458279A |
| 公開(公告)日 | 2003.11.26 |
| 申請(專利)號 | CN03129043.4 |
| 申請日期 | 2003.06.05 |
| 專利名稱 | 一種利用大腸桿菌發(fā)酵制備小干擾RNA分子的方法 |
| 主分類號 | C12P19/34 |
| 分類號 | C12P19/34;C12N15/70 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 復(fù)旦大學(xué);上海復(fù)旦新楊生物科技有限責(zé)任公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 錢志康;宣寶琴;李琳;徐劍鋒 |
| 地址 | 200433上海市邯鄲路220號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海正旦專利代理有限公司 |
| 代理人 | 陸飛 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種制備RNAi用siRNA分子的方法，其特征在于包括構(gòu)建長鏈dsRNA表達載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主菌，通過工業(yè)化規(guī)模發(fā)酵，用堿-SDS法抽提發(fā)酵菌體得到全RNA和質(zhì)粒DNA的混合物；該混合物用CF-11柱進行純化得到dsRNA；最后利用大腸桿菌RNase III將長鏈的dsRNA切成12-30bp的小干擾RNA。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種利用大腸桿菌發(fā)酵大規(guī)模制備RNA干擾用小干擾RNA分子的新方法。本發(fā)明構(gòu)建了長雙鏈RNA表達載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主菌，通過大規(guī)模發(fā)酵，用堿-SDS法抽提發(fā)酵菌體得到全RNA和質(zhì)粒DNA的混合物。該混合物用CF-11柱進行純化得到長雙鏈RNA。最后利用大腸桿菌III型RNA酶將長雙鏈RNA切成12-30bp的小干擾RNA。得到的siRNA用分光光度法檢測其純度與濃度，OD260/OD280＝1.978，表明樣品的純度相當(dāng)高。每100g大腸桿菌菌體得到siRNA樣品約為210mg。 |
| 國際公布 |
