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動脈粥樣硬化:第二節(jié) 甘油三酯測定

甘油三酯又稱中性脂肪,由于其甘油骨架上分別結(jié)合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸,相應(yīng)稱為甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG)。血清中90%~95%是TG,TG中結(jié)合的脂肪酸分別為油酸(44%)、軟脂酸(26%)、亞油酸(16%)和棕櫚油酸(7%)。血清TG…

甘油三酯又稱中性脂肪,由于其甘油骨架上分別結(jié)合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸,相應(yīng)稱為甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG)。血清中90%~95%是TG,TG中結(jié)合的脂肪酸分別為油酸(44%)、軟脂酸(26%)、亞油酸(16%)和棕櫚油酸(7%)。

血清TG測定方法一般分為物理化學(xué)法、化學(xué)法及酶法三m.quanxiangyun.cn/yishi/大類。

血清中TG的化學(xué)組成并不單一,準(zhǔn)確求其分子較為困難。因標(biāo)準(zhǔn)不同,測定結(jié)果存在差異;瘜W(xué)法多采用三棕櫚精(軟脂精)(分子量807.3)、三油精(分子量895.4)為標(biāo)準(zhǔn),按摩爾濃度計算。酶法測定以三油精為標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行換算。

1.化學(xué)法

化學(xué)測定法包括:①TG的抽提分離;②皂化;③甘油糖的氧化;④氧化生成甲掌顯色定量等四個階段。操作較為繁雜,影響測定因素太多,本法準(zhǔn)確性差,一般很少用。

2.酶法測定

酶法測定包括:①TG的抽提與皂化;②加水分解生成甘油糖定量等二個階段。目前常規(guī)檢測應(yīng)用的方法有甘油激酶(glycerolkinase,GK)法和甘油氧化酶(glycerol Oxidase,GOD)法。操作簡便,快速準(zhǔn)確,并能在自動化生化分析儀上進(jìn)行批量測定。

一、乙酰丙酮法

1.原理

血清中加入異丙醇抽提取甘油三酯,經(jīng)KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸,甘油在過碘酸作用下氧化成甲醛,在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色的3,5二乙酰,1,4二氫甲基吡啶,其顏色的深淺與甘油三酯的含量成正比,420nm測定定量。該法可用于基本功訓(xùn)練及組織細(xì)胞TG的提取測定。

2.試劑組

代號種類濃度組成貯2-8℃有效時間
R1抽提液 (CH3)CHOH(A.R)重蒸餾  
R2吸附劑 氧化鋁,水洗除去微細(xì)顆粒,

110℃烤干3h以上

閉封一周
R3皂化劑5%KOH 5g+Hm.quanxiangyun.cn2O→100ml  
R4醋酸溶液2mol/LCH3COOH 11.5ml+H2O→100ml  
R5過碘酸鈉0.05mol/LNaIO4 1.07g+H2O→100ml  
R6氧化劑 R4 1體積+R51體積 一周
R7醋酸銨液 CH3COONH2 15.4g+H2O→100ml  
R8顯色劑CH3COCH2COCH30.75ml+R-1
40ml+R-7 100ml+R-4 80ml 
R9參考液2mg/dl三油酸甘油酯

2mg+R-1→100ml(TG100mg/dl)

  

3.操作

按圖15-3操作。

圖15-3 血清甘油三酯(乙酯丙酮法)測定操作圖

4.計算

血清TG濃度=ESA/EST×1.13(mmol/L)

二、酶法(GK-GPO-POD比色法)

血清中甘油三酯經(jīng)脂肪酶水解為甘油和脂肪酸,甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下,生成3-磷酸甘油,爾后,在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羥丙酮并生成H2O2,H2O2與底物4-氨基安替比林和ESPAS在過氧化物酶(POD)作用下,生成紅色亞醌化合物(quinoneimine),比色(500nm),其顏色深淺與甘油三酯含量成正比。

(一)手工測定法

1.試劑組成

代號種類濃度貯存2~8℃
R1磷酸甘油氧化酶≥3.0KU/L冷藏
(A液)抗壞血酸氧化酶≥1.0KU/L 
 甘油激酶≥0.7KU/L 
 4-氨基安替比林80mg/L 
R2脂蛋白脂酶≥2.0KU/L冷藏
 過氧化物酶≥10KU/L 
 ESPAS300mg/L 
R3(參考液)甘油酸三脂200mg/dl(2.26mmol/L)冷藏

*:一般采用商品試劑盒

圖15-4 血清甘油三酯測定法(酶法)操作圖

2.操作

按圖15-4操作。

3.計算

血清TG濃度=ESA/EST×2.26(mmol/L)

(二)生化分析儀檢測

全自動生化分析儀測定操作(以CL-7200型為例)。

1.試劑

A液:GK,GPO,4-AA-P、抗壞血酸氧化酶等。

B液:POD,Lipase,ESPAS等。

標(biāo)準(zhǔn)液:甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。

2.上機(jī)參數(shù)

名稱參數(shù)
方法終點法
波長雙波長(540nm 700nm)
試劑A反應(yīng)時間2~3min
試劑B反應(yīng)時間5~6min
反應(yīng)溫度37℃
樣本用量4μl
試劑A用量200μl
試劑B用量100μl
單位mmol/L

3.操作過程

4.計算

以△A=A2-A1并根據(jù)同樣之標(biāo)準(zhǔn)或質(zhì)控物計算,自動打印結(jié)果。

5.注意事項

①試劑與樣本量可根據(jù)分析儀要求按比例改變。

②試劑在有效期內(nèi)2~8℃避光保存。

③樣本中甘油三酯含量超過11mmol/L需用生理鹽水稀釋后再測。

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