藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇與應(yīng)用

　　一、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥理學(xué)研究中的選擇與應(yīng)用

　�。ㄒ�)鎮(zhèn)靜催眠和抗精神病藥物實(shí)驗(yàn)

　　1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：研究動(dòng)物行為藥理學(xué)最常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、貓、鴿、猴等。實(shí)驗(yàn)時(shí)常用兩個(gè)種屬的動(dòng)物。第一種是用實(shí)驗(yàn)比較方便的動(dòng)物，如小鼠、大鼠。第二種是用非嚙齡類動(dòng)物，最好選用猴子或猩猩。選擇動(dòng)物時(shí)應(yīng)注意各種系動(dòng)物的特點(diǎn)。第二種適用于作刺激研究，因?yàn)榇笫笠曈X(jué)、嗅覺(jué)較靈敏，做條件反射等實(shí)驗(yàn)反應(yīng)良好。但大鼠對(duì)許多藥物易產(chǎn)生耐藥性。貓和狗的自然行為多樣而穩(wěn)定，常用于神經(jīng)藥理、神經(jīng)生理以及生為觀察的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。猴子和猩猩則更接近于人類。大鼠和小鼠的活動(dòng)在夜間比白天多，故研究中樞神經(jīng)抑制藥在夜間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)較好。不同種屬的動(dòng)物對(duì)藥物的反應(yīng)可以有明顯差異。如嗎啡對(duì)大鼠、兔、狗和猴的作用是抑制性的。便對(duì)小鼠、貓、鵝和馬的作用是興奮性的。所以做實(shí)驗(yàn)時(shí)要包括不同種屬的動(dòng)物。

貓

　　2．藥物對(duì)動(dòng)物一般活動(dòng)的影響：常用且簡(jiǎn)易的方法是采用直接觀察法，觀察動(dòng)物的一般行為和特殊情緒，如激怒、躁狂、瞳孔大小、對(duì)捕捉抵抗等行為。為便于記錄，可用評(píng)定行為改變和行為分級(jí)的方法，采用定性和定量來(lái)記錄動(dòng)物行為。如常用Norton對(duì)猴、貓、地鼠的行為定量分級(jí)，將對(duì)照組和用藥組動(dòng)物進(jìn)行定時(shí)觀察，并按下述行為分級(jí)法打分記錄（表10-28)，求出每組平均數(shù)，進(jìn)行七檢驗(yàn)，確定有無(wú)顯著性。

表10-28　Norton行為分級(jí)法

　　3．常用催眠藥對(duì)各種動(dòng)物的影響：各種動(dòng)物的催眠劑量見(jiàn)表10-29。

表10-29　藥物對(duì)各種動(dòng)物的催眠劑量（荻原彌四郎1971)

　　*表示腹腔注射

　�。ǘ�)抗精神病藥物的行為實(shí)驗(yàn)

　　去水嗎啡能增強(qiáng)大白鼠舔、嗅、咬等定向行為，這是由于藥物增強(qiáng)黑質(zhì)--經(jīng)紋狀體腦內(nèi)多巴胺（DA)能系統(tǒng)功能的緣故。安定劑抑制大白鼠的定向運(yùn)動(dòng)的作用強(qiáng)度與安定劑抑制腦內(nèi)DA能受體功能有相關(guān)性。常選用150～200克大白鼠，皮下注射去水嗎啡2mg/kg，作定向運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)。

　　去水嗎啡引起的攀爬行為是動(dòng)物黑質(zhì)－紋狀狀體系統(tǒng)內(nèi)DA能功能增強(qiáng)的表現(xiàn)。Costentin發(fā)現(xiàn)小白鼠注射去水嗎啡后喜歡垂吊在鐵絲網(wǎng)上，應(yīng)用安定劑可拮抗去水嗎啡引起的小白鼠垂吊現(xiàn)象，這一拮抗作用與安定劑作用的強(qiáng)弱有較好的平行關(guān)系。

　　僵住癥是動(dòng)物錐體外系運(yùn)動(dòng)功能失調(diào)的一種表現(xiàn)，常選用150～200克大白鼠作此實(shí)驗(yàn)。

　　（三)抗驚厥和抗震顫麻痹藥實(shí)驗(yàn)

　　1．化學(xué)物質(zhì)引起驚厥法：常選用小白鼠，也可采用大白鼠，貓或兔則可作特殊觀察。采用戊四唑驚厥法，在小鼠皮下注射85mg/kg（最大也有用150mg/kg，此劑量已是LD₉₈)，腹腔注射為100mg/kg（最大175mg/kg)作實(shí)驗(yàn)時(shí)，不同種系小鼠可有不同反應(yīng)，Bastian曾比較過(guò)由8處供應(yīng)的4個(gè)種系的小鼠，其中CFW種小鼠在持續(xù)驚厥后立即死亡的發(fā)生率為100%，而其它3種有10～30%動(dòng)物在持續(xù)驚厥后存活很長(zhǎng)時(shí)間不死亡。因此作藥物活性比較時(shí)，應(yīng)選用同一品種。

　　2．聽(tīng)源性發(fā)作法：某些敏感動(dòng)物（主要是鼠類)在受到強(qiáng)鈴聲刺激時(shí)，能產(chǎn)生一種定型的運(yùn)動(dòng)性發(fā)作，稱為“聽(tīng)源性發(fā)作”（Audiogenic seizure)，這是研究抗癲癇藥物的一種常用模型。如果選用DBA/2J系小鼠（聽(tīng)源陽(yáng)性鼠)供科研用。也可采用一些藥物來(lái)提高大鼠聽(tīng)源性發(fā)作陽(yáng)性率。如在亞驚厥劑量的戊四唑（16mg/kg)、士的寧（1mg/kg)、若味毒（1mg/kg)或咖啡因（150mg/kg)作用基礎(chǔ)上，給予鈴聲刺激，可使部分聽(tīng)源陰性鼠也能產(chǎn)生發(fā)作。上述藥物所致的陽(yáng)性發(fā)作率分別為47.%、66.5%、38.4%、18.1%。

　　3．慢性實(shí)驗(yàn)性癲癇模型：各種動(dòng)物的大腦皮質(zhì)感覺(jué)動(dòng)物區(qū)是致癇敏感區(qū)之一，特別是猴極易在此區(qū)形成癲癇病灶。將鋁劑注入到中央前回和中央后回比單注入中央前回易于形成；將鋁劑注入到猴和貓的顳葉前部，可引起運(yùn)動(dòng)性和精神運(yùn)動(dòng)性發(fā)作；大腦皮質(zhì)其區(qū)區(qū)域不敏感。此外，還報(bào)導(dǎo)注于杏仁殼核也可引起發(fā)作。病理模型的形成以猴最為敏感，貓次之，其他動(dòng)物不敏感。所以，常選用猴作此實(shí)驗(yàn)，麻醉后無(wú)菌條件以猴最為敏感，貓次之，其他動(dòng)物不敏感。所以，常選用猴作此實(shí)驗(yàn)，麻醉后無(wú)菌條件下將消毒后的4%氫氧化鋁乳劑用皮內(nèi)針頭注到前腦和后腦皮質(zhì)感覺(jué)運(yùn)動(dòng)區(qū)，注射兩點(diǎn)或數(shù)點(diǎn)，勿使藥液外流于軟腦膜內(nèi)，可在注后35-60天，出現(xiàn)自發(fā)性癲癇發(fā)作。如果鋁劑形成的病灶嚴(yán)重，也可在注后2-3周發(fā)作。醫(yī)學(xué)全.在線提供

　　鈷可引起大白鼠、小白鼠和貓的慢性實(shí)驗(yàn)性癲癇，而猴對(duì)鈷卻不敏感，常選用大白鼠，在麻醉消毒下，開(kāi)顱將消毒的市售鈷粉（200篩孔)約30mg，放在皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)的前側(cè)（面積為10mm2)，安好電極，縫合，動(dòng)物約在放置鈷粉后2～3周，出現(xiàn)置鈷對(duì)側(cè)肢體發(fā)生陣攣，少數(shù)動(dòng)物于局部陣攣后出現(xiàn)全身發(fā)作。

　　點(diǎn)燃效應(yīng)（Kindling Effect,KE)引起發(fā)作是一種較好的慢性實(shí)驗(yàn)性癲癇模型。其形成方法是以一定的刺激強(qiáng)度和時(shí)間間隔刺激腦的一定部位。動(dòng)物常選用大白鼠、貓、猴、兔等。刺激強(qiáng)度：大白鼠杏仁核和海馬為50～400μA，貓為100～500μA，猴和狒狒為200～400μA。

　　4．抗震顫麻痹藥物篩選方法：目前篩選抗震顫麻痹藥物的方法，常采用藥物誘發(fā)震顫和損傷錐體外系某些核團(tuán)以誘發(fā)震顫。如常選用豚鼠藥物誘發(fā)震顫法，按0.002%水楊酸毒扁豆堿溶液以0.3mg/kg劑量注往前右側(cè)頸動(dòng)脈，注射速度要嚴(yán)格控制在20～25秒之間，并在注射時(shí)暫夾住左側(cè)頸動(dòng)脈，以保證藥液進(jìn)右側(cè)椎動(dòng)脈。動(dòng)物多于注射毒扁豆鹼后15～20秒出現(xiàn)癥狀，典型陽(yáng)性反應(yīng)是頭左偏，身體強(qiáng)迫性向左側(cè)旋轉(zhuǎn)作環(huán)形運(yùn)動(dòng)，同時(shí)可伴有眼球左偏并向?qū)��?cè)震顫，全部癥狀持續(xù)5分鐘。還可選用小白鼠，按25mg/kg腹腔注射0.25%檳榔鹼溶液；腹腔注射0.5%匹魯卡品，50mg/kg；腹腔注射0.0014%氯化震顫素0.14mg/kg，均可出現(xiàn)明顯震顫。

　�。ㄋ�)鎮(zhèn)痛藥物實(shí)驗(yàn)

　　目前國(guó)內(nèi)外篩選鎮(zhèn)痛藥的常用致痛方法，概括有物理性（熱、電、機(jī)械)和化學(xué)性刺激法。這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，其中以熱、電刺激及鉀離子皮下透入致痛法使用居多。常用的動(dòng)物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、狗、猴等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的痛反應(yīng)指標(biāo)為嘶叫、舔足、甩尾、掙扎及皮膚、肌肉抽搐等。

　　應(yīng)用猴子研究鎮(zhèn)痛劑的依賴性較為理想，因?yàn)殒?zhèn)痛劑對(duì)它的信賴性表現(xiàn)與人較接近，戒斷癥狀又較明顯且易于觀察，已成為新鎮(zhèn)痛劑進(jìn)入臨床試用前必須的試驗(yàn)。

　�。ㄎ�)解熱、抗炎藥實(shí)驗(yàn)

　　炎熱和炎癥都是臨床常見(jiàn)的癥狀。實(shí)驗(yàn)室常用病毒、細(xì)菌、細(xì)菌產(chǎn)物、內(nèi)毒素和抗原抗體復(fù)合物引起發(fā)熱，也有用微量前列腺素（PGE)直接注入動(dòng)物腦室或丘腦下部原抗體復(fù)合物引起發(fā)熱，也有用微量前列腺素（PGE)直接注入動(dòng)物腦室或丘腦下部進(jìn)行致熱。

　　常用的致炎方法有以血管通透性增加為主的足蹠浮腫法、無(wú)菌性胸（腹)膜炎、佐劑性關(guān)節(jié)炎、紫外線紅斑法、放射線照射法以及其它菌性炎癥；有觀察白細(xì)胞游走的羧甲基纖維素囊法、大白鼠角膜法、毛細(xì)管法和小室濾膜法；有制造肉芽腫模型的棉球法、紙片法、瓊脂法、巴豆油囊袋法和受精雞卵法等。此外亦有用妊娠大白鼠子宮自發(fā)收縮為指標(biāo)，間接反應(yīng)炎癥過(guò)程的方法。

　　實(shí)驗(yàn)性炎癥應(yīng)該選用哺乳類動(dòng)物，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷牟煌�采用不同種屬的動(dòng)物。例如足跖浮腫模型須采用大白鼠，形成過(guò)敏性炎癥應(yīng)首選豚鼠，而家兔則最易產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)。此外，幼小動(dòng)物（如小狗、小兔、小白鼠)炎癥反應(yīng)相當(dāng)微弱，甚至可以完全不出現(xiàn)。家兔對(duì)刺激的炎癥反應(yīng)與其毛色有關(guān)，白毛兔比有色毛兔的炎癥強(qiáng)度和炎癥經(jīng)過(guò)均較劇烈。曾致炎組織比初次炎癥刺激時(shí)反應(yīng)微弱，因此不宜在同一部位反復(fù)復(fù)制炎癥。

　　動(dòng)物種屬、年齡和形態(tài)特點(diǎn)，對(duì)發(fā)熱反應(yīng)有明顯影響。例如小白鼠、豚鼠，有時(shí)包括大白鼠，均不宜用于復(fù)制發(fā)熱模型。這些動(dòng)物的恒溫機(jī)能差，對(duì)發(fā)熱刺激的反應(yīng)低，有時(shí)對(duì)熱源性物質(zhì)的刺激體溫反而下降。而兔的發(fā)熱反應(yīng)典型恒定，因而常用。但須注意，家兔年齡在20～30天以內(nèi)者可不發(fā)生發(fā)熱反應(yīng)，而體重在2kg左右者，結(jié)果最為滿意。大白鼠則以體重150～200g為最適宜。同種動(dòng)物形態(tài)上的差異也會(huì)影響到體溫反應(yīng)，如毛家兔和長(zhǎng)毛狗的體溫比短毛者上升的慢。狗對(duì)外界環(huán)境的變動(dòng)反應(yīng)穩(wěn)定，但小白鼠和大白鼠的體溫波動(dòng)很大。動(dòng)物長(zhǎng)時(shí)間捆綁時(shí)，體溫可顯著降低。當(dāng)動(dòng)物掙扎時(shí)則可使體溫升高。因此通常把動(dòng)物固定在木盒內(nèi)，以限制其多余的活動(dòng)。給動(dòng)物注射菌液或內(nèi)毒素時(shí)，注射量并不與發(fā)熱反應(yīng)強(qiáng)度成正比。注入量過(guò)大時(shí)的體溫可不上升，故劑量的選擇必須恰好處。靜注菌液或內(nèi)毒素等引起的發(fā)熱較皮下注射迅速而強(qiáng)烈。但注射化學(xué)刺激劑則必須注射到動(dòng)物皮下才會(huì)引起較強(qiáng)反應(yīng)�？赡苁窃擃愇镔|(zhì)刺激皮下組織造成無(wú)菌性炎癥所致。

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