四、單克隆抗體
在單克隆抗體問(wèn)世前，ICC染色中通常所用的抗血清均為多克隆抗體，即抗血清含有多少B淋巴細(xì)胞株所分泌的抗體，這些抗體的性質(zhì)不完全相同，不同的抗血清之間可能有交叉反應(yīng)，使ICC染色受到一定限制。近年，單克隆抗體的引入，特別是市售單克隆抗體和種類(lèi)和數(shù)量的迅猛發(fā)展，及各實(shí)驗(yàn)者比較容易制備自己所需的單克隆抗體，為ICC染色在特殊抗原定位、生物活性檢測(cè)、腫瘤標(biāo)記識(shí)別中，開(kāi)辟了更廣闊的前景。
1．單克隆抗體的制備（Oi,TV, 1980)(詳見(jiàn)第一章 )。
2．單克隆抗體的特點(diǎn)
�。�1)酶標(biāo)抗體：自己制備或市售商的單克隆抗體，絕大部分為小鼠IgG、Kappa型，所以酶標(biāo)抗體選擇抗小鼠IgG的多價(jià)抗體，進(jìn)行ICC染色比較穩(wěn)妥。
�。�2)特異性：專(zhuān)一性強(qiáng)：?jiǎn)慰寺】贵w是由同一細(xì)胞株分泌的，性質(zhì)均一，且有相同的親合力，識(shí)別同一抗原決定簇。這在研究某些類(lèi)似物質(zhì)的局部定位、分型、生物活性檢測(cè)及腫瘤診斷等方面有重要意義。但同時(shí)也應(yīng)注意，不同抗原的相同抗原決定簇有被識(shí)別的可能，所以應(yīng)結(jié)合其它方法，判斷其結(jié)果。
�。�3)不需純化抗原：多克隆抗血清在制備時(shí)，要求抗原相當(dāng)純。而制備單克隆抗體時(shí)，不需純化抗原。一些不能純化的組織（游離)細(xì)胞可直接免疫，經(jīng)克隆化，篩選所需細(xì)胞株，避免了純化抗原的麻煩，這在研究人類(lèi)各種疾病等有重要價(jià)值。
�。�4)工作液濃度：不同的單克隆抗體效價(jià)各異，所以ICC染色時(shí)需檢測(cè)最佳稀釋倍數(shù)，大量培養(yǎng)純化的抗體可用更高的稀釋倍數(shù)。
�。�5)切片選擇：?jiǎn)慰寺】贵w僅識(shí)別抗原物質(zhì)的某一抗原決定簇，所以以新鮮組織的冰凍切片為首選。因?yàn)樵诠潭ㄟ^(guò)程中，可能使抗原物質(zhì)發(fā)生某些改變，致使其與單克隆抗體反應(yīng)的抗原決定簇丟失，故擬用石蠟切片固定組織冰凍切片。ICC染色時(shí)，在制備單克隆抗體過(guò)程中，應(yīng)該用同樣標(biāo)本和方法篩選所需細(xì)胞株，才能確保染色成功。
�。�6)特異性檢測(cè)：?jiǎn)慰寺?抗體的特異性強(qiáng)，性質(zhì)均一，沒(méi)有必要進(jìn)行RIA分析和吸收實(shí)驗(yàn)等。自己制備的單克隆抗體，其特異性檢測(cè)最佳方法為相同組織提取物質(zhì)進(jìn)行免疫電泳，確定抗原的分子量等。
（7)發(fā)現(xiàn)新物質(zhì)：在制備腫瘤或其它組織細(xì)胞單克隆抗體時(shí)，往往有各種各樣的抗原特異性雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生，在篩選過(guò)程中，能夠發(fā)現(xiàn)一些新的雜交瘤株，經(jīng)培養(yǎng)制備相應(yīng)的抗體，用于一些新領(lǐng)域的研究。
