1．分子克隆常用緩沖液
2．磷酸緩沖液
�。�1)25℃下0.1mol/L磷酸鉀緩沖液的配制※
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pH |
1mol/L K2HPO4(ml) |
1mol/L KH2PO4(ml) |
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5.8 |
8.5 |
91.5 |
|
6.0 |
13.2 |
86.8 |
|
6.2 |
19.2 |
80.8 |
|
6.4 |
27.8 |
72.2 |
|
6.6 |
38.1 |
61.9 |
|
6.8 |
49.7 |
50.3 |
|
7.0 |
61.5 |
38.5 |
|
7.2 |
71.7 |
28.3 |
|
7.4 |
80.2 |
19.8 |
|
7.6 |
86.6 |
13.4 |
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7.8 |
90.8 |
9.2 |
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8.0 |
94.0 |
6.2 |
�。�2)25℃下0.1mol/L磷酸鈉緩沖液的配制※
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pH |
1mol/L Na2HPO4(ml) |
1mol/L NaH2PO4(ml) |
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5.8 |
7.9 |
92.1 |
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6.0 |
12.0 |
88.0 |
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6.2 |
17.8 |
82.2 |
|
6.4 |
25.5 |
74.5 |
|
6.6 |
35.2 |
64.8 |
|
6.8 |
46.3 |
53.7 |
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7.0 |
57.7 |
42.3 |
|
7.2 |
68.4 |
31.6 |
|
7.4 |
77.4 |
22.6 |
|
7.6 |
84.5 |
15.5 |
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7.8 |
89.6 |
10.4 |
|
8.0 |
93.2 |
6.8 |
※:用蒸餾水將混合的兩種1mol/L貯存液稀釋至1000ml，根據(jù)Henderson-Hasselbalch方程計(jì)算其pH值：
pH=pK’+1g([質(zhì)子受體]/[質(zhì)子供體])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．電泳緩沖液
測(cè)序凝膠加樣緩沖液
98%去離子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚藍(lán)
甲酰胺：許多批號(hào)的試劑級(jí)甲酰胺，其純度符合使用要求，無須再進(jìn)行處理。不過，一旦略呈黃色，則應(yīng)用在磁力攪拌器上將甲酰胺與Dowex XG8混合床樹脂共同攪拌1小時(shí)進(jìn)行去離子處理，并用Whatman 1號(hào)濾紙過濾2次，去離子甲酰胺分裝成小份，充氮存于-70℃。
常用的電泳緩沖液
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緩沖液 |
使用液 |
濃貯存液（每升) |
| Tris-乙酸（TAE) | 1×：0.04mol/L Tris-乙酸 | 50×：242g Tris堿 |
| 0.001mol/L EDTA | 57.1ml冰乙酸 | |
| 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| Tris-磷酸（TPE) | 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 | 10×:10g Tris堿 |
| 0.002mol/L EDTA | 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml) | |
| 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| Tris-硼酸（TBE)a | 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 | 5×：54g Tris堿 |
| 0.001mol/L EDTA | 27.5硼酸 | |
| 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| 堿性緩沖液b | 1×:50mmol/L NaOH | 1×:5ml 10mol/L NaOH |
| 1mmol/L EDTA | 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) | |
| Tris-甘氨酸c | 1×:25mmol/L Tris | 5×:15.1g Tris |
| 250mmol/L 甘氨酸 | 94g 苷氨酸（電泳級(jí))（pH8.3) | |
| 0.1% SDS | 50ml 10% SDS(電泳級(jí)) |
說明：
�、賂BE溶液長(zhǎng)時(shí)間存放后會(huì)形成沉淀物，為避免這一問題，可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。
以片都以1×TBE作為使用液（即1：5稀釋濃貯液)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。但0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1：10稀釋的貯存液作為使用液。
進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小， 故通過緩沖液的電流量通常較大，需要使用1×TBE以提供足夠的緩沖容量。
�、趬A性電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。
�、跿ris-甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
2×SDS凝膠加樣緩沖液：
100mmol/L Tris·HCl(6.8)
200mmol/L二硫蘇糖醇（DTT)
4%SDS（電泳級(jí))
0.2%溴酚藍(lán)
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，應(yīng)在臨用前取1mol/L貯存液現(xiàn)加于上述緩沖液中。
4．凝膠加樣緩沖液
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緩沖液類型 |
6×緩沖液 |
貯存溫度 |
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0.25%溴酚藍(lán) |
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| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 40%（W/V)蔗糖水溶液 | ||
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0.25溴酚藍(lán) |
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| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 15%聚蔗糖(Ficoll400) | ||
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0.25%溴酚藍(lán) |
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| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 30%甘油水溶液 | ||
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0.25%溴酚藍(lán) |
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| 40%(W/V)蔗糖水溶液 | ||
| 堿性加樣緩沖液: | ||
| 300mmol/L NaOH | ||
| 6mmol/L EDTA | ||
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18%聚蔗糖(Ficoll400) |
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| 0.15%溴甲酚綠 | ||
| 0.25%二甲苯青FF |
使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保DNA均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，含有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽極泳動(dòng)的染料。溴酚藍(lán)在瓊脂糖中移動(dòng)的速率約為二甲苯青FF的2.2倍，而與瓊脂糖濃度無關(guān)。以0.5×TBF作電泳液時(shí)，溴酚藍(lán)在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率約與長(zhǎng)300bp的雙鏈線狀DNA相同，而二甲苯青FF的泳動(dòng)則與長(zhǎng)4kb的雙鏈線狀DNA相同。在瓊脂糖濃度為0.5%～1.4%的范圍內(nèi)，這些對(duì)應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。
選用哪一種加樣染料純屬個(gè)人喜惡。但是，對(duì)于堿性凝膠應(yīng)當(dāng)使用溴甲酚綠作為示蹤染料，因?yàn)樵趬A性pH條件下其顯色較溴酚更藍(lán)為鮮明。
