常用貯存液的配制

　　1．30%丙烯酰胺溶液

　　【配制方法】

　　將29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補(bǔ)加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器（0.45μm孔徑)過(guò)濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。

　　【注意】

　　丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具。可認(rèn)為聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗�還可能會(huì)含有少量未聚合材料。

　　一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1Mallinckrodt)，攪拌過(guò)夜，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾以純化之。

　　在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。

　　2．40%丙烯酰胺

　　【配制方法】

　　把380g丙烯酰胺（DNA測(cè)序級(jí))和20g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為1L。

　　【注意】

　　見上述配制30%丙烯酰胺的說(shuō)明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測(cè)定。

　　3．放線菌素D溶液

　　【配制方法】

　　把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對(duì)照讀取OD⁴⁴⁰值。放線菌素D（分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21，900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于-20℃。

　　【注意】

　　放線菌素D是致畸劑和致癌劑，配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，而不能在開放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行，謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

　　藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過(guò)測(cè)量貯存液在440nm波長(zhǎng)處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。醫(yī)學(xué)全.在線提供

　　4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP)溶液

　　【配制方法】

　　在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存于-70℃

　　5．10mol/L乙酸酰溶液

　　【配制方法】

　　把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過(guò)濾除菌。

　　6．10%過(guò)硫酸銨溶液

　　【配制方法】

　　把1g過(guò)硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4℃保存數(shù)周。

　　7．BCIP溶液

　　【配制方法】

　　把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃

　　8．2×BES緩沖鹽溶液

　　【配制方法】

　　用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N，N-雙（2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na₂HPO₄，室溫下用HCl調(diào)節(jié)　該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成小份，保存于-20℃。

　　9．1mol/L CaCl₂溶液

　　【配制方法】

　　在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl₂·6H₂O，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃。

　　【注意】

　　制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalgene濾器（0.45μm孔徑)過(guò)濾除菌，然后驟冷至0℃。

　　10．2.5mol/L CaCl₂溶液

　　【配制方法】

　　在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl₂·6H₂O，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

　　11．1mol/L二硫蘇糖醇（DTT)溶液

　　【配制方法】

　　用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2)溶解3.09g DTT，過(guò)濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

　　【注意】

　　DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。

　　12．脫氧核苷三磷酸（dNTP)溶液

　　【配制方法】

　　把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié)　每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH試紙檢測(cè))，把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當(dāng)稀釋，在下表中給出的波長(zhǎng)下讀取光密度計(jì)算出每種dNTP的實(shí)際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70℃。

　　比色杯光徑為1cm時(shí),吸光度=εM

　　13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

　　【配制方法】

　　在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na·2H₂O)，在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)　溶液的pH值至8.0（約需20g NaOH顆粒)然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。

　　【注意】

　　EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0，才能完全溶解。

　　14．溴化乙錠（10mg/ml溶液)

　　【配制方法】

　　在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。

　　【注意】

　　小心：溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時(shí)務(wù)必戴上手套，稱量染料時(shí)要戴面罩。

　　15．2×HEPES緩沖鹽溶液

　　【配制方法】

　　用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na₂PO₄·2H₂O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié)　pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成5ml小份，貯存于-20℃。

　　16．IPTG溶液

　　【配制方法】

　　IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量為238.3)，在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器過(guò)濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

[1] [2] [3] [4] 下一頁(yè)