方法名稱： |
黃連上清丸—黃芩苷的測(cè)定—高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測(cè)定黃連上清丸中黃芩苷的含量。 本方法適用于中成藥黃連上清丸。 |
方法原理： |
將供試品加乙醇超聲提取，加乙醇定容，上清液過(guò)濾作為供試品液。精密吸取供試品液10µL，注入液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm處檢測(cè)黃芩苷吸收值，以外標(biāo)法計(jì)算含量。 |
試劑： |
1. 甲醇（色譜純) 2. 磷酸 3. 乙醇 |
儀器設(shè)備： |
1 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 Spherrisorb C18 柱 (300 × 4.6mm，5µm) 1.3 紫外吸收檢測(cè)器 2 色譜條件 2.1 流動(dòng)相：甲醇 水 磷酸 = 55 45 0.2 2.2 流速：0.7mL/min 2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm 2.4 柱溫：30℃ |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 精密稱取研細(xì)的本品粉末0.5g。 2. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品 (60℃減壓干燥4h) 12.8mg，置100mL量瓶?jī)?nèi)，加50％乙醇至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。 3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，置于10mL量瓶中，用50％乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。 4.供試品溶液的制備 將供試品置50mL容量瓶中，加50％乙醇40mL超聲提取30min，加50％乙醇至刻度，搖勻，靜置，取上清液，經(jīng)0.45µm微孔濾膜過(guò)濾，濾液即為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液10µL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm處測(cè)定黃芩苷的吸收值，以標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。 2. 供試品的測(cè)定 精密吸取上述供試品液10µL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm處測(cè)定黃芩苷的吸收值，用外標(biāo)法計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
姚仲青，金芳. HPLC法測(cè)定黃連上清丸中黃芩苷的含量. 云南中醫(yī)中藥雜志，1999，19(6)：590. |
