方法名稱： |
三黃片–大黃素和大黃酚的測(cè)定--高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測(cè)定三黃片中大黃素和大黃酚的含量。 本方法適用于中成藥三黃片。 |
方法原理： |
供試品加乙醇于水浴上加熱回流，用乙醇補(bǔ)足減失的重量后，精密量取濾液，蒸干，加30%乙醇-鹽酸置水浴中加熱水解后，用氯仿提取，合并提取液，水浴蒸干，無水乙醇-醋酸乙酯溶解殘?jiān)�，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)254nm處檢測(cè)大黃素和大黃酚的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
試劑： |
1. 甲醇 2.磷酸溶液（0.1%) 3.乙醇 4.無水乙醇 5.鹽酸 6.醋酸乙酯 7 .氯仿 |
儀器設(shè)備： |
1 儀器 1.1高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)應(yīng)不低于2000。 1.3 紫外吸收檢測(cè)器 2 色譜條件 2.1 流動(dòng)相：甲醇 0.1%磷酸溶液= 85 15 2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm 2.3 柱溫：室溫 |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 取本品20片，除去包衣，精密稱定，求得每片平均重量，研細(xì)（過三號(hào)篩)，精密稱取適量（約相當(dāng)于1片的重量)。 2. 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取大黃素和大黃酚對(duì)照品適量，加無水乙醇- 醋酸乙酯（2 ：1)制成每1 mL含大黃素0.01 mg、大黃酚0.025mg的混合溶液。 3. 供試品溶液的制備 供試品置錐形瓶中，精密加乙醇25mL, 密塞，稱定重量，置水浴上加熱回流1小時(shí)，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10 ：1)溶液15mL，置水浴中加熱水解1小時(shí)，立即冷卻，用氯仿強(qiáng)力振搖提取4次，每次15mL，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘?jiān)脽o水乙醇-醋酸乙酯（2 ：1)溶解，移置25mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，為供試品溶液。 注：“精密稱定”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)254nm處測(cè)定大黃素（C15H10O5)和大黃酚（C15H10O4)的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，一部，p.328。 |
