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公開(公告)號(hào)
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CN1255542C
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公開(公告)日
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2006.05.10
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410022186.7
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申請(qǐng)日期
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2004.03.29
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專利名稱
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融合型幽門螺桿菌粘附素基因工程疫苗的制備方法
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主分類號(hào)
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C12N15/62(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12N15/62(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61P1/04(2006.01)N;A61P31/04(2006.01)N
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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鄒全明;劉正祥;洪 愉;朱永紅;童文德;解慶華
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地址
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400038重慶市沙坪壩區(qū)高灘巖正街30號(hào)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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重慶華科專利事務(wù)所
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代理人
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康海燕
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國省代碼
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重慶;85
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主權(quán)項(xiàng)
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一種融合型幽門螺桿菌粘附素基因工程疫苗的制備方法，其特征在于： 首先克隆LTB或CTB、HpaA基因，克隆LTB、CTB、HpaA基因的引物為： LTBP15’-ccatggctccccagtctattacag-3’(NcoI) P25’-ggatcctgcggcgcgtagttttccatactgattgccg-3’(BamHI) CTBP35’-cccatgggatgattaaattaaaatttg-3’(NcoI) P45’-cgggatcctgcggcgcgtaaacggtatgattaacgc-3’(BamHI) HpaAP55’-ggatcctacgaatgaagtcgctttgaaat-3’(BamHI) P65’-ctcgagtcggtttcttttgcc-3’(XhoI) 下劃線部分為酶切位點(diǎn)；在上游基因LTB和CTB的3’端，即在引物P2和P4上設(shè)計(jì)linker序列，連接LTB和HpaA，或CTB和HpaA，構(gòu)建LTB-HpaA或CTB-HpaA融合表達(dá)載體和高效表達(dá)菌株； 然后，用發(fā)酵方式高密度表達(dá)融合蛋白； 最后，采用包涵體提取，復(fù)性，離子交換層析、凝膠過濾層析純化技術(shù)的順序組合，大量獲得LTB-HpaA或CTB-HpaA，并將該疫苗分別制備成口服劑、注射劑及滴/噴鼻劑。
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摘要
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本發(fā)明公開了融合型幽門螺桿菌粘附素基因工程菌疫苗的構(gòu)建及其制備方法，其特征在于用粘附素HpaA通過基因重組方法構(gòu)建幽門螺桿菌粘附素與大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位或霍亂毒素B亞單位分子內(nèi)佐劑融合工程菌，經(jīng)過高密度發(fā)酵、包涵體提取、復(fù)性及純化大量獲得所需疫苗蛋白，該疫苗可以分別被制備成口服劑、注射劑及滴/噴鼻劑。該基因工程疫苗構(gòu)建方法獨(dú)特，制備工藝簡捷、容易放大、重復(fù)性好，所獲疫苗蛋白純度高，動(dòng)物試驗(yàn)證明可有效刺激機(jī)體產(chǎn)生較高的免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)作用。
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國際公布
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