| 公開(公告)號 | CN1307198C |
| 公開(公告)日 | 2007.03.28 |
| 申請(專利)號 | CN200510060668.6 |
| 申請日期 | 2005.09.08 |
| 專利名稱 | 眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素的分離純化方法 |
| 主分類號 | C07K14/435(2006.01)I |
| 分類號 | C07K14/435(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 童富淡;張�；�;金蘇華 |
| 地址 | 310029浙江省杭州市江干區(qū)凱旋路258號浙江大學(xué)華家池校區(qū)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 馮子玲 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素的分離純化方法，其特征在于以下步驟：(1)按重量份1份眼鏡蛇毒原液使用體積份10份丙酮研磨、洗滌，操作時(shí)，先取適量丙酮研磨眼鏡蛇毒原液成勻漿，以濾紙過濾勻漿，再用剩余丙酮洗滌，室溫放置使丙酮揮發(fā)，即得眼鏡蛇毒丙酮粉；(2)眼鏡蛇毒丙酮粉按1∶10(W/V)溶解于蒸餾水中，用50％的乙酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.0～5.0，10000rpm4℃低溫離心5～10min，取上清液；(3)按上清液體積計(jì)，加入25％的聚丙烯酸(polyacrylic acid，PAA)至終濃度為3～5％(W/V)，記錄PAA加入量，4℃放置30～50min，2000rpm4℃低溫離心3～5min，取沉淀溶解于適量蒸餾水中，用0.5mol/L碳酸鈉溶液調(diào)pH至9.5～10.0，加氯化鈉至終濃度為4～5％(W/V)，以已加入的PAA∶氯化鈣溶液為1∶35(W/V)加入20％的氯化鈣溶液并混勻，室溫放置30min，以鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.0～5.0，室溫放置30～50min，10000rpm4℃低溫離心5～10min，取上清液；(4)上清液用超細(xì)顆粒Sephadex G-50凝膠柱分離，以5～10mmol/L pH7.0～7.5含0.2～0.3mol/L氯化鈉的磷酸鹽緩沖液洗脫，第一個(gè)洗脫主峰為神經(jīng)毒素，第二個(gè)洗脫主峰為細(xì)胞毒素，收集各級分溶液凍干，即分別為眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種眼鏡蛇蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素的分離純化方法，可同時(shí)分離眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素，提高了眼鏡蛇毒的綜合利用效率。本發(fā)明先使用丙酮處理眼鏡蛇蛇毒原液，以除去蛇毒原液中的脂溶性成分，以酸調(diào)節(jié)蛇毒丙酮粉水溶液的pH，離心除去蛇毒中的中酸性蛋白和多肽，再以PAA特異吸附并沉淀蛇毒中的堿性蛋白和堿性多肽，離心分離PAA-堿性蛋白/多肽復(fù)合物，除去水溶性成分；利用pH變化使PAA-堿性蛋白/多肽解吸附，用氯化鈣除去PAA；以Sephadex G-50(超細(xì)顆粒)凝膠柱分離純化眼鏡蛇毒神經(jīng)毒素和細(xì)胞毒素，產(chǎn)品含鹽量低，可直接冷凍干燥。 |
| 國際公布 |
