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人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌高表達(dá)載體和制備方法

公開(公告)號 CN1743457A  
公開(公告)日 2006.03.08  
申請(專利)號 CN200410073165.8  
申請日期 2004.10.11  
專利名稱 人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌高表達(dá)載體和制備方法  
主分類號 C12N15/70(2006.01)I  
分類號 C12N15/70(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 陳蘇民;秦 云;陳南春  
地址 710049陜西省西安市長樂西路15號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 西安通大專利代理有限責(zé)任公司  
代理人 孫 楓  
國省代碼 陜西;61  
主權(quán)項(xiàng) 一種人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌表達(dá)載體,其特征在于:所述的人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌表達(dá)載體是指用分子克隆技術(shù)將從人體組織cDNA文庫中擴(kuò)增得到人骨形成蛋白-4成熟肽的cDNA序列,再克隆重組獲得的大腸桿菌表達(dá)載體pDH2-hB4m,該載體能夠在大腸桿菌中高水平表達(dá)出人骨形成蛋白-4成熟肽,載體DNA全長4,014個(gè)核苷酸對,全部核苷酸序列如下:1AGATCTCTCTCACCTACCAAACAATGCCCCCCTGCAAAAAATAAATTCATATAAAAAACATCTAGAGAGAGTGGATGGTTTGTTACGGGGGGACGTTTTTTATTTAAGTATATTTTTTGT61TACAGATAACCATCTGCGGTGATAAATTATCTCTGGCGGTGTTGACATAAATACCACTGGATGTCTATTGGTAGACGCCACTATTTAATAGAGACCGCCACAACTGTATTTATGGTGACC121CGGTGATACTGAGCACATCAGCAGGACGCACTGACCACCATGAAGGTGACGCTCTTAAAAGCCACTATGACTCGTGTAGTCGTCCTGCGTGACTGGTGGTACTTCCACTGCGAGAATTTT181ATTAAGCCCTGAAGAAGGGCAGCATTCAAAGCAGAAGGCTTTGGGGTGTGTGATACGAAATAATTCGGGACTTCTTCCCGTCGTAAGTTTCGTCTTCCGAAACCCCACACACTATGCTTT241CGAAGCATTGGTTAAAAATTAAGGAGAATTCATGAAGCATCACTCACAGCGGGCCAGGAAGCTTCGTAACCAATTTTTAATTCCTCTTAAGTACTTCGTAGTGAGTGTCGCCCGGTCCTT301GAAGAATAAGAACTGCCGGCGCCACTCGCTCTATGTGGACTTCAGCGATGTGGGCTGGAACTTCTTATTCTTGACGGCCGCGGTGAGCGAGATACACCTGAAGTCGCTACACCCGACCTT361TGACTGGATTGTGGCCCCACCAGGCTACCAGGCCTTCTACTGCCATGGGGACTGCCCCTTACTGACCTAACACCGGGGTGGTCCGATGGTCCGGAAGATGACGGTACCCCTGACGGGGAA421TCCACTGGCTGACCACCTCAACTCAACCAACCATGCCATTGTGCAGACCCTGGTCAATTCAGGTGACCGACTGGTGGAGTTGAGTTGGTTGGTACGGTAACACGTCTGGGACCAGTTAAG481TGTCAATTCCAGTATCCCCAAAGCCTGTTGTGTGCCCACTGAACTGAGTGCCATCTCCATACAGTTAAGGTCATAGGGGTTTCGGACAACACACGGGTGACTTGACTCACGGTAGAGGTA541GCTGTACCTGGATGAGTATGATAAGGTGGTACTGAAAAATTATCAGGAGATGGTAGTAGACGACATGGACCTACTCATACTATTCCACCATGACTTTTTAATAGTCCTCTACCATCATCT601GGGATGTGGGTGCCGCTGATAATCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTTCTGTTTTGCCCTACACCCACGGCGACTATTAGATCTCAGCTGGACGTCCGTACGTTCGAAGACAAAAC661GCGGATGAGAGAAGATTTTCAGCCTGATACAGCTTAAATCAGAACGCAGAAGCGGTCTGACGCCTACTCTCTTCTAAAAGTCGGACTATGTCGAATTTAGTCTTGCGTCTTCGCCAGACT721TAAAACAGAATTTGCCTCCCGGCAGTAGCGCGGTGGTCCCACCTGACCCCATGCCGAACTATTTTGTCTTAAACGGAGGGCCGTCATCGCGCCACCAGGGTGGACTGGGGTACGGCTTGA781CAGAAGTGAAACGCCGTAGCGCCGATGGTAGTGTGGGGTCTCCCCATGCGAGAGTAGCCAGTCTTCACTTTGCGGCATCGCGGCTACCATCACACCCCAGAGGGGTACGCTCTCATCGGT841ACTGCCAGGCATCAAATAAAACGAAAGGCTCAGTCGAAAGACTGGGCCTTTCGTTTTATCTGACGGTCCGTAGTTTATTTTGCTTTCCGAGTCAGCTTTCTGACCCGGAAAGCAAAATAG901TGTTGTTTGTCGGTGAACGCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGCCGGGAGCGGATTTGAACACAACAAACAGCCACTTGCGAGAGGACTCATCCTGTTTAGGCGGCCCTCGCCTAAACTTG961GTTGCGAAGCAACGGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGCCATAAACTGCCAGGCATCAACGCTTCGTTGCCGGGCCTCCCACCGCCCGTCCTGCGGGCGGTATTTGACGGTCCGTA1021CAAATTAAGCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGTTTCTACAAACTCTTTGTGTTTAATTCGTCTTCCGGTAGGACTGCCTACCGGAAAAACGCAAAGATGTTTGAGAAACA1081TTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGAATAAAAAGATTTATGTAAGTTTATACATAGGCGAGTACTCTGTTATTGGGACTATTTAC1141CTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTGAAGTTATTATAACTTTTTCCTTCTCATACTCATAAGTTGTAAAGGCACAGCGGGAATAA1201CCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAGGGAAAAAACGCCGTAAAACGGAAGGACAAAAACGAGTGGGTCTTTGCGACCACTTTCAT1261AAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCTTTCTACGACTTCTAGTCAACCCACGTGCTCACCCAATGTAGCTTGACCTAGAGTTGTCG1321GGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAACCATTCTAGGAACTCTCAAAAGCGGGGCTTCTTGCAAAAGGTTACTACTCGTGAAAATTT1381GTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCAAGACGATACACCGCGCCATAATAGGGCATAACTGCGGCCCGTTCTCGTTGAGCCAGCG1441CGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTGCGTATGTGATAAGAGTCTTACTGAACCAACTCATGAGTGGTCAGTGTCTTTTCGTAGAA1501ACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTTGCCTACCGTACTGTCATTCTCTTAATACGTCACGACGGTATTGGTACTCACTATTGTGA1561GCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACCGCCGGTTGAATGAAGACTGTTGCTAGCCTCCTGGCTTCCTCGATTGGCGAAAAAACGTG1621AACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATATTGTACCCCCTAGTACATTGAGCGGAACTAGCAACCCTTGGCCTCGACTTACTTCGGTAT1681CCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTAGGTTTGCTGCTCGCACTGTGGTGCTACGGACATCGTTACCGTTGTTGCAACGCGTTTGAT1741TTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGAATTGACCGCTTGATGAATGAGATCGAAGGGCC  
摘要 本發(fā)明涉及人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌表達(dá)載體及其所表達(dá)的人骨形成蛋白4成熟肽的制備方法。所述的載體是指用分子克隆技術(shù)重組獲得的大腸桿菌表達(dá)載體pDH2-hB4m,載體全長4,014個(gè)核苷酸對;所述利用表達(dá)載體pDH2-hB4m制備具有生物學(xué)活性人骨形成蛋白-4成熟肽的方法,包括宿主菌轉(zhuǎn)化表達(dá)、培養(yǎng)、純化、復(fù)性、活性鑒定步驟。本發(fā)明所提供的大腸桿菌高表達(dá)載體和用該載體轉(zhuǎn)化宿主菌表達(dá)人骨形成蛋白-4成熟肽的制備方法,可以作為新的基因工程產(chǎn)品及其方法推向臨床治療、診斷和科學(xué)研究應(yīng)用,并推向市場。  
國際公布  
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