| 公開(公告)號 | CN1737164A |
| 公開(公告)日 | 2006.02.22 |
| 申請(專利)號 | CN200510065445.9 |
| 申請日期 | 2005.04.06 |
| 專利名稱 | 一種快速檢測乙型肝炎病毒耐藥基因變異的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.8.27 CN 200410054067.X |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海復(fù)旦悅達生物技術(shù)有限公司;復(fù)旦大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 袁正宏;王 華;耿海峰;華 兵;邵 醇 |
| 地址 | 201203上海市浦東張江高科技園區(qū)居里路1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海正旦專利代理有限公司 |
| 代理人 | 包兆宜 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種快速檢測乙型肝炎病毒耐藥基因變異的方法，其特征是利用實時熒光定量PCRMGBTaqman探針技術(shù)，依據(jù)乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥突變區(qū)YMDD核酸序列，設(shè)計引物及探針檢測HBVYMDD區(qū)域的基因變異，包括下述步驟，a、根據(jù)乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥性相關(guān)突變位點的靶基因序列設(shè)計、合成引物和熒光探針，所述的靶基因片段長度為50-200個堿基；b、上述引物和熒光探針與聚合酶鏈式反應(yīng)成份組成熒光聚合酶鏈式反應(yīng)體系，其中鎂離子濃度為5mM，Taq酶的用量為0.25單位/反應(yīng)；c、采用Chelex100抽提乙型肝炎病毒DNA，加入上述反應(yīng)體系循環(huán)擴增；d、讀取熒光值，判定基因變異情況，估算混合突變病毒毒株比例。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥相關(guān)基因變異的方法。本發(fā)明利用實時熒光定量PCR MGB Taqman探針技術(shù)，依據(jù)乙肝病毒拉米夫定耐藥突變區(qū)YMDD核酸序列，設(shè)計引物及探針檢測HBV YMDD區(qū)域的基因變異。采用PCR反應(yīng)混合液A，B、Taq酶、HBV DNA抽提試劑、陰性質(zhì)控品、ddH2O優(yōu)化改進后制備診斷試劑盒。能快速準確檢測出特定位點基因突變情況，并能對混合突變的病毒基因比例進行相對定量，可用于臨床乙型肝炎藥物治療耐藥突變的快速檢測。本發(fā)明方法和試劑盒不受醫(yī)療機構(gòu)儀器設(shè)備的條件限制，易于普及。 |
| 國際公布 |
