| 公開(公告)號 | CN1242063C |
| 公開(公告)日 | 2006.02.15 |
| 申請(專利)號 | CN200310108141.7 |
| 申請日期 | 2003.10.24 |
| 專利名稱 | 具有綠色熒光蛋白示蹤和抗性篩選標(biāo)記的RNAi載體pGO |
| 主分類號 | C12N15/63(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/63(2006.01)I;C12N15/79(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王紅陽;鄢和新;張 瑞;陳 磊;吳孟超 |
| 地址 | 200433上海市楊浦區(qū)翔殷路800號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 丁振英 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種RNAi載體pGO，制備方法如下：(1)將pEGFP-C2載體用同尾酶BglII和BamHI雙酶切切除EGFP和SV40polyA之間多個常用酶切位點BglII、XholI、HindIII、EcoRI、SalI、BamHI，保留酶切位點MluI及主要構(gòu)件pUC復(fù)制起點pUCori、f1復(fù)制起點flori、細菌啟動子P、卡那霉素基因/新霉素抗性基因Kan/Neo、HSV-TKPolyA、CMV啟動子、增強綠色熒光蛋白基因EGFP、SV40PolyA、SV40早期啟動子；(2)以HEK293細胞基因組DNA為模板，用上游引物5’-CCGACGCGTAGATCTAAGGTCGGGCAGGAAGAG-3’和下游引物5’-CCGACGCGTCTCGAGGAATTCGGATCCGTCGACAAAAAGAAGACCACGGTGTTTCGTCCTTTC-3’擴增人源U6啟動子，其中在上游和下游引物中分別引入MluI酶切位點，在下游引物中引入多克隆位點XhoI、EcoRI、BamHI、SalI和BbsI；(3)將人源U6啟動子經(jīng)MluI酶切后插入上述(1)改造后pEGFP-C2的酶切位點MluI，即得pGO。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及醫(yī)藥分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，是一種可用于特異性抑制靶基因表達的具有綠色熒光蛋白示蹤和真核細胞抗性篩選標(biāo)記的RNA干擾(RNAi)載體pGO。本發(fā)明RNAi載體pGO是對pEGFP-C2載體的改造，去除了其原有的多克隆位點，在SW0 polyA和f1原核復(fù)制起點之間插入帶有相應(yīng)多克隆位點的U6啟動子構(gòu)成。只要在U6啟動子下游的多克隆位點中的適當(dāng)位點插入針對靶基因的siRNA模板，轉(zhuǎn)染細胞后就可特異并有效地抑制該基因的表達。因而本發(fā)明的RNAi載體pGO可用于制備研究基因功能的試劑或用于抗腫瘤藥物的研究和開發(fā)。 |
| 國際公布 |
