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分離突變體及克隆互補(bǔ)基因的新方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1192106C  
公開(kāi)(公告)日 2005.03.09  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN96196200.3  
申請(qǐng)日期 1996.06.24  
專利名稱 分離突變體及克隆互補(bǔ)基因的新方法  
主分類號(hào) C12N15/31  
分類號(hào) C12N15/31;C12N15/80;C12N15/65;C12N15/63;C12N15/10;C12N1/15;C07K14/38;C12Q1/02;C12Q1/68;//(C12N1/15,C12R1:645)  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1995.6.23 EP 95201707.7; 1995.8.30 EP 95202346.3  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 丹尼斯科成分公司(丹尼斯科公司)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 倫德特·亨德里克·德格拉夫  
地址 丹麥布拉布蘭  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng) PCT/NL1996/000259 1996.6.24  
進(jìn)入國(guó)家日期 1998.02.11  
專利代理機(jī)構(gòu) 永新專利商標(biāo)代理有限公司  
代理人 林曉紅  
國(guó)省代碼 丹麥;DK  
主權(quán)項(xiàng) 一種核酸盒,包括a)編碼一種雙向標(biāo)記的核酸序列,b)與編碼雙向標(biāo)記的核酸序列可操作地連接的一種基本轉(zhuǎn)錄單位,c)以如此的方式與基本轉(zhuǎn)錄單位連接的一種可誘導(dǎo)增強(qiáng)序列或激活序列,所述的連接方式為在誘導(dǎo)增強(qiáng)序列或激活序列時(shí)能使編碼雙向標(biāo)記的核酸序列表達(dá),所述的可誘導(dǎo)增強(qiáng)序列或激活序列衍生自與一部分代謝的活性相關(guān)的基因。  
摘要 本發(fā)明屬于微生物突變和突變體篩選的領(lǐng)域,具體地,本發(fā)明涉及以簡(jiǎn)單、直接和特異的方式獲得代謝突變體。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中還可以獲得不包括重組DNA的所需突變體,從而因縮短立法程序而加速將所述突變體參入供人類消費(fèi)和應(yīng)用的產(chǎn)品中。本發(fā)明的方法涉及隨機(jī)突變和特異篩選所需的代謝突變體。本發(fā)明描述了一種核酸盒及其在篩選突變體的方法中的應(yīng)用,所述的核酸盒包括編碼一種雙向標(biāo)記的核酸序列,所述的核酸盒進(jìn)一步包括與編碼雙向標(biāo)記的核酸序列可操作地連接的一種基本轉(zhuǎn)錄單位,所述的核酸盒還包括以如此的方式與基本轉(zhuǎn)錄單位連接的一種可誘導(dǎo)增強(qiáng)序列或激活序列,所述的連接方式為在誘導(dǎo)增強(qiáng)序列或激活序列時(shí)能使編碼雙向標(biāo)記的核酸序列表達(dá),所述的可誘導(dǎo)增強(qiáng)序列或激活序列衍生自與一部分代謝的活性相關(guān)的基因。另外還描述了編碼可誘導(dǎo)增強(qiáng)序列或激活序列的激活調(diào)節(jié)物的調(diào)節(jié)物基因xlnR,以及所述基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物在過(guò)量表達(dá)同源或異源蛋白質(zhì)或肽中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及其中不存在所述基因或所述基因失活的剔除突變體,以及具有增加的或降低的DNA結(jié)合能力的突變體。  
國(guó)際公布 WO1997/000962 英 1997.1.9  
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