| 公開(公告)號 | CN1566357A |
| 公開(公告)日 | 2005.01.19 |
| 申請(專利)號 | CN03129262.3 |
| 申請日期 | 2003.06.16 |
| 專利名稱 | 一種重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子的生產(chǎn)方法 |
| 主分類號 | C12P21/00 |
| 分類號 | C12P21/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海賽達(dá)生物藥業(yè)股份有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 張玫萍;曹緯 |
| 地址 | 201203上海市浦東張江高科技園區(qū)居里路1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中原信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 羅大忱 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)采用常規(guī)的方法對發(fā)酵培養(yǎng)所獲得的誘導(dǎo)表達(dá)菌進(jìn)行裂菌獲得TNF粗制品；(2)將步驟(1)的TNF粗制品，上樣于用pH為8～9的緩沖溶液平衡的Q-sepharose陰離子交換柱，用平衡緩沖液淋洗至樣品光吸收值至基線，用NaCl溶液線性洗脫，將目的峰產(chǎn)物用pH為7～8磷酸緩沖液透析，獲得目的峰透析液；(3)將步驟(2)的目的峰透析液上樣于SP-sepharose陽離子交換柱，用平衡緩沖液淋洗至樣品光吸收值至基線，用NaCl溶液線性洗脫，收集目的峰產(chǎn)物，即為本發(fā)明的重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子的生產(chǎn)方法，特別涉及一種采用通過菌種發(fā)酵和離子交換法制備重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子的方法。包括如下步驟：采用常規(guī)的方法進(jìn)行裂菌，用Q-sepharose陰離子交換層析，用SP-sepharose陽離子交換層析。采用此生產(chǎn)工藝，單批生產(chǎn)300～400g菌體，可以獲得800～1200mg的nrhTNF蛋白，純度達(dá)到95％以上，比活達(dá)2～4×108IU/mg，活性回收率為80％以上，原液各項指標(biāo)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，取得良好的生產(chǎn)結(jié)果。與以往的生產(chǎn)方法比較，本項目的工藝路線簡單，原液質(zhì)量合格，工藝放大容易，操作周期短，因而優(yōu)勢十分明顯。 |
| 國際公布 |
