| 公開(公告)號 | CN1514024A |
| 公開(公告)日 | 2004.07.21 |
| 申請(專利)號 | CN03139010.2 |
| 申請日期 | 2003.08.19 |
| 專利名稱 | 應用胎兒臍血阻斷血友病A致病基因傳遞的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 山東省血液中心 |
| 發(fā)明(設計)人 | 丁培芳;王勤友;孫汶生;申法奎;王謝桐;;張雪芹;滕彬 |
| 地址 | 250014山東省濟南市山師東路22號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 濟南三達專利事務所 |
| 代理人 | 李健康 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權項 | 一種應用胎兒臍血阻斷血友病A致病基因傳遞的方法，由以下步驟組成：(1)樣品制備：選擇有血友病A(HA)家族史的女性于妊娠20周后，在超聲引導下經皮抽取胎兒臍帶靜脈血0.9ml或8ml，立即與O.1ml或0.2ml3.8％枸櫞酸鈉抗凝劑混勻，同時以相同方法和用量抽取攜帶者及其丈夫和正常人外周靜脈血作對照；(2)離心：將上述樣品于4℃條件下，以2400～2500轉/分鐘離心20～25分鐘，取上層1/3～2/3血漿進行凝血因子VIII活性(FVIII：C)和血管性血友病因子(vWF)血清學的生化測定；取白細胞層提取DNA進行PCR聯(lián)合基因診斷；(3)篩選分型：依據上述測定的血漿凝血因子VIII活性和血管性血友病因子濃度，確診血友病A患者及其攜帶者，并根據血漿FVIII：C濃度將血友病A患者分為重型HA，其FVIII：C＜1％；中型HA，其FVIII：C1％～5％；輕型HA，其FVIII：C5％～25％、亞臨床型HA，其FVIII：C25％～45％；(4)直接基因診斷：應用長距離PCR(LD-PCR)技術對上述樣品提取的DNA進行產前基因診斷，根據電泳條帶的大小和分子量的大小綜合判定患者是否存在FVIII基因內含子22倒位；若只出現(xiàn)12Kb帶，判為野生型即非倒位；若只出現(xiàn)11Kb帶，判為倒位患者；若出現(xiàn)12Kb和11Kb兩條帶，判為倒位的攜帶者；(5)阻斷HA致病基因傳遞：對于上述判為倒位的患者或判為倒位的攜帶者，應終止妊娠，切斷HA致病基因的傳遞；(6)間接基因診斷：對上述非倒位的重型HA、中型HA和輕型HA家系，依次采用Bcl-I PCR/RFLP分析技術、基因內含子13(CA)n及內含子22(GT)n(AG)n二核苷酸重復序列多態(tài)性分析技術及與FVIII基因緊密連鎖的可變串聯(lián)重復序列多態(tài)性分析技術(St14/VNTR)進行間接基因診斷；(7)阻斷HA致病基因傳遞：步驟(6)依次進行的各步基因診斷中，當樣品判為HA患者或攜帶者時，終止妊娠，切斷HA致病基因的傳遞；未作的診斷步驟停止。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種應用胎兒臍血阻斷血友病A致病基因傳遞的方法，其方法包括(1)樣品制備，(2)離心，(3)篩選分型，(4)直接基因診斷，(5)阻斷HA致病基因傳遞，(6)間接基因診斷，(7)阻斷HA致病基因傳遞等步驟。本發(fā)明的方法具有采集標本方便，樣品用量少，結果準確可靠，產前診斷率高的特點，能夠有效地防止血友病A的誤診和漏診，降低血友病A的發(fā)病率。 |
| 國際公布 |
