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使用純化的抗原特異性抗體檢測軍團菌屬細菌的方法

公開(公告)號 CN1136008C  
公開(公告)日 2004.01.28  
申請(專利)號 CN99810035.8  
申請日期 1999.08.25  
專利名稱 使用純化的抗原特異性抗體檢測軍團菌屬細菌的方法  
主分類號 A61K39/40  
分類號 A61K39/40;A61K35/74  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1998.8.25 US 09/139,720  
申請(專利權(quán))人 比南股份有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 V·A·庫奇納;E·V·莫洛科夫  
地址 美國緬因州  
頒證日 2004.01.28  
國際申請 PCT/US99/19506 1999.8.25  
進入國家日期 2001.02.26  
專利代理機構(gòu) 上海專利商標事務(wù)所  
代理人 徐迅  
國省代碼 美國;US  
主權(quán)項 一種檢測液體中軍團菌屬至少一種細菌或血清型的細菌、或其糖抗原成分存在的方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:(a)將已鑒定的軍團菌屬菌種或菌種血清型的細菌培養(yǎng)至合適大小,收集濕細胞沉淀形式的該菌種或菌種血清型的細胞;(b)用一系列步驟從所述濕細胞沉淀中獲得基本無蛋白質(zhì)的糖抗原,這些步驟包括(i)將所述濕細胞沉淀懸浮在堿性溶液中并混合;(ii)用強酸將pH調(diào)節(jié)到酸性pH;(iii)將步驟(ii)的混合物分成兩層;(iv)收集上層,將其pH調(diào)節(jié)到約中性;(v)在步驟(iv)的產(chǎn)物中加入廣譜蛋白酶,消化破壞剩余蛋白質(zhì);(vi)將步驟(v)的產(chǎn)物pH用弱堿水溶液調(diào)節(jié)到堿性一側(cè)和;(vii)分離出基本無蛋白的糖抗原;(c)通過間隔分子將步驟(b)中得到的基本無蛋白質(zhì)的糖抗原與層析親和柱交聯(lián);(d)將針對如步驟(a)中培養(yǎng)的同一軍團菌屬菌種或菌種血清型的抗體通過步驟(c)的親和層析柱,產(chǎn)生純化的抗原特異性抗體;和(e)對懷疑含有如步驟(a)中培養(yǎng)的同一軍團菌屬菌種或菌種血清型的液體樣品進行試驗,該試驗包括步驟:通過使液體樣品接觸主要含有步驟(d)的純化抗原特異性抗體的檢測劑,檢測所述軍團菌屬菌種或菌種血清型的糖抗原。  
摘要 從軍團菌屬菌種或菌種血清型細菌分離得到基本無蛋白的O-糖或O-多糖抗原,并與活化層析柱偶聯(lián)。用如此制備的層析柱純化針對軍團菌屬的同一菌種或菌種血清型的未加工抗體。用得到的抗原特異性抗體在免疫化學試驗中檢測人中軍團病、龐蒂亞克熱和其它軍團菌導(dǎo)致的疾病,并用于檢測環(huán)境樣品中的軍團菌屬細菌。本發(fā)明詳細描述了一種在免疫層析試驗裝置中進行的快速、高特異性和靈敏的侵軍團菌血清1型的免疫試驗。  
國際公布 WO00/10584 英 2000.3.2  
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