| 公開(公告)號 | CN1120238C |
| 公開(公告)日 | 2003.09.03 |
| 申請(專利)號 | CN98101753.3 |
| 申請日期 | 1998.05.04 |
| 專利名稱 | 以粘粒為基礎構建重組單純皰疹病毒及其用途 |
| 主分類號 | C12N7/01 |
| 分類號 | C12N7/01;A61K39/245;A61P31/22;//C12N7/01,C12R1:91 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 本元正陽基因技術股份有限公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | 吳小兵;伍志堅;董小巖;侯云德 |
| 地址 | 100176北京市北京經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)永昌中路6號董小巖 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權項 | 一種用于產(chǎn)生重組單純皰疹病毒的方法，其特征在于，它由以下步驟組成：(1)將外源基因X表達盒DNA片段的兩端加XbaI接頭，插入重組粘粒cos56的單一XbaI位點中構成cos56-X，將cos6、cos28、cos14、cos56-X及cos48五個粘粒的組合命名為Set X；(2)將Set X經(jīng)PacI酶切后共轉染HSV敏感細胞，被導入的五個片段在細胞中發(fā)生同源重組而生成重組病毒HSV1-X毒種；(3)將得到的毒種進行空斑篩選和純化，獲得重組病毒HSV1-X。 |
| 摘要 | 本發(fā)明敘述了一種以含有HSV1全基因組的5個粘粒(cos6，cos28，cos14，cos56，cos48)為基礎的簡便而高效地產(chǎn)生重組單純皰疹病毒的方法。該方法包括將外源基因表達盒插入粘粒cos56或/和cos6中HSV-1 DNA的單一XbaI位點中。將含有外源基因的粘粒與其余4個粘粒等摩爾混合，經(jīng)PacI酶切后共轉染對HSV-1感染敏感的細胞，通過5個HSV片段的同源重組而產(chǎn)生含有外源基因的重組單純皰疹病毒。依照這種方法，產(chǎn)生了能表達大腸桿菌lacZ基因的單純皰疹病毒HSV1-lacZ100。HSV1-lacZ100的特征在于，在野生型HSV1 17株的UL44基因的XbaI位點中插入了CMV-lacZ-polyA片段，插入方向不限定。HSV1-lacZ100的用途有：1)作為研究神經(jīng)傳導的示蹤劑；2)作為抗單純皰疹病毒藥物及其它抗病毒藥物的靶病毒；3)作為HSV1擴增子載體研究中的輔助病毒以更靈敏地監(jiān)測輔助病毒滴度變化。 |
| 國際公布 |
