細胞免疫（CMⅠ)是由多種細胞相互作用的結(jié)果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數(shù)量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜，且很難標準化
一、遲發(fā)型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發(fā)是檢測遲發(fā)型過敏反應（DTH)的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發(fā)對曾經(jīng)使病人致敏的抗原的再次應答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質(zhì)發(fā)生致敏的能力。
1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結(jié)核菌純蛋白衍生物（PPD)、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內(nèi)注射少量可溶性抗原，24～48小后，測量紅腫硬結(jié)的大小，硬結(jié)直徑大于10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力，若皮試無反應，可用更高濃度的抗原重復試驗，若仍無反應即為陰性，需排除皮試技術(shù)誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由于細胞免疫功能缺損，或由于細胞免疫功能缺損，或由于嚴重感染（麻疹、慢性播散性結(jié)核)造成的無反應性。
2．接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB)誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質(zhì)結(jié)合而導至DTH反應。在動物試驗時，初次皮膚上涂抹DNCB后間隔7～10天再激發(fā)刺激，則皮膚出現(xiàn)即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數(shù)量和功能，最易采集的是血標本，首先需分離或純化淋巴細胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液，當將血液重疊于淋巴細胞分層液之上離心時，由于紅細胞（1.092)、多形核白細胞（1.090)、淋巴細胞（1.070)的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞，其中淋巴細胞占80%，單核細胞占20%，淋巴細胞中T細胞占80%，B細胞占4%～10%，其作為非DT、非B細胞。
1．T細胞計數(shù)
（1)E花環(huán)法：人類T細胞表面有SRBC受體（CD2)能與SRBC結(jié)合形成玫瑰花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，將經(jīng)分層液分離現(xiàn)的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經(jīng)37℃培養(yǎng)5～10分鐘放4℃過夜，取細胞懸計數(shù)，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結(jié)成花環(huán)即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞，而不用做T細胞計數(shù)。
�。�2)用單克隆抗體計數(shù)T細胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結(jié)合，再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結(jié)果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3+細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞占70%～80%。正常人的CD4+細胞和CD8+細胞之和應與CD3+細胞數(shù)一致。CD4+細胞與CD8+細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小于1.7。
2．T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質(zhì)稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉(zhuǎn)化。T細胞轉(zhuǎn)化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成增加，最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數(shù)轉(zhuǎn)化后的淋巴細胞數(shù)，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR)摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉(zhuǎn)化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內(nèi)的酶可將MTT分解產(chǎn)生藍黑色甲（fromazan)產(chǎn)物。該產(chǎn)物的多少與活性細胞數(shù)正相關。結(jié)果可用酶標檢測儀（595mm)測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標。此法的結(jié)果與3H-TdR摻入法平行，并能反應試驗中的活細胞數(shù)（表20-3)。
表20－3 淋巴細胞增殖反應的刺激物
| 分裂原 | T細胞 | B細胞 |
| 植物血凝素（PHA) | + | － |
| 刀豆蛋白A（ConA) | + | － |
| 美洲商陸（PWM) | + | + |
| 葡萄球菌蛋白A（SPA) | ±﹡ | + |
| 副傷寒桿B（SPB) | ± | + |
注： PWH主要是T細胞分裂原，也可通過刺激T細胞分泌可溶性因子誘導B細胞增殖分化；
﹡SPA誘導B細胞分裂不需要T細胞協(xié)助，但誘導B細胞激活抗體分泌細胞需要T細胞協(xié)助
