（一)原理
以聚丙烯酰胺為支持介質(zhì)，血清脂質(zhì)用染料預(yù)染，使脂蛋白著色，經(jīng)電泳后，一般可分出三條區(qū)帶，即β-、前β-、α-脂蛋白。并可用光密度掃描儀檢測其相對百分數(shù)，乘以總脂量，可求出三種脂蛋白的含量。
（二)試劑與儀器
1．試劑
（1)分離膠緩沖液：三羥甲基氨基甲烷（Tris)18.3g,lmol/L鹽酸24ml，加水至100ml(pH8.9)。
（2)丙烯酰胺Ⅰ液：丙烯酰胺（Acr)15g，甲叉雙丙烯酰胺（Bis)0.4g，混勻。
（3)0.35%過硫酸銨（AP)
（4)四甲基乙二胺（TEMED)
（5)丙烯酰胺Ⅱ液：Acr10g、Bis2.5g、加水至100ml，混勻。
（6)濃縮膠緩沖液：Tris 6g、1mol/L HCl。
（7)0.002%核黃素，48ml，加水至100ml，pH6.7。
（8)電極緩沖液：甘氨酸2.88g、Tris0.6g、加水至1000ml，pH8.3。
（9)1%蘇丹黑B染色液：蘇丹黑B200mg，丙二醇20ml，水浴加溫至溶，離心，去除沉渣，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
（10)40%蔗糖水溶液。
2．儀器
電泳儀、光密度掃描儀
（三)操作
1．制膠
（1)先準(zhǔn)備清潔的0.5×7.5cm玻璃管，封口底。
（2)配制5%濃度凝膠：取丙烯酰胺Ⅰ液5ml，分離膠緩沖液5ml及Ap液10ml混合，再加TEMED，20μl，混均，用吸管注入每支玻璃管內(nèi)使膠柱長約4cm，上層用蒸餾水沿管壁仔細加水到凝膠表面，千萬別沖散凝膠界面，使凝膠與空氣隔絕。靜置20～40min，等凝膠凝固后，除去上層水，再加上濃縮膠。
（3)濃縮膠制備：取丙烯酰胺Ⅱ液1.0ml、濃縮膠緩沖液0.5ml、核黃素液0.5ml和水2mlm.quanxiangyun.cn/hushi/混勻，加TEMED20μl混勻，迅速加入到分離膠上層約1cm高度，沿管壁仔細加蒸餾水覆蓋，千萬別沖散凝膠界面。置日光燈處聚合30min，也可在強光下聚合，聚合好的濃縮膠呈淡乳白色。凝膠可置4℃冰箱備用。
2．血清預(yù)染與加樣
在0.25ml血清中加入1%蘇丹黑B染色液0.025ml，搖勻，于37℃水溶保溫45min。離心除去沉渣，取預(yù)染血清30μl，加在聚合好的傾去水層的濃縮膠表面，再加一滴40%蔗糖液，混勻，然后小心地在上面加滿電極緩沖液，再裝在電泳槽上。
3．電泳
將電極液加入上下電泳槽內(nèi)，靠樣品端的上槽接負極，下槽為正極，接通電源，調(diào)節(jié)電流為2-5mA/管，30～40min后，關(guān)閉電源。
4．剝膠
從電泳槽上取下凝膠管，用帶長針頭的注射器吸水注入凝膠與玻管內(nèi)壁之間，使凝膠與玻管內(nèi)壁分離，再用吸耳球推出凝膠。根據(jù)不同型號的光密掃描儀，凝膠掃描或者將裝有凝膠的玻管直接掃描定量。
電泳后凝膠一般出現(xiàn)三條區(qū)帶，從正極到負極依次為α-脂蛋白，β-脂蛋白和前β-脂蛋白，前β-脂蛋白處于濃縮膠和分離膠之間。
5．定量
漿凝膠或連同玻管一道置于光密度計掃描儀上進行掃描，計算每個峰的面積占各峰之和和總面積之比，即為每種脂蛋白組份的百分比。
（一)原理
以瓊脂糖凝膠為支持介質(zhì)，先用脂類染料將血清進行預(yù)染，使血清脂蛋白著色，然后電泳。切下各脂蛋白區(qū)帶，加熱溶解，冷卻后比色�；蛘哂霉饷芏扔嬛苯訏呙鑳x定各區(qū)帶。計算出α、β-和前β-脂蛋白的相對百分比。
（二)試劑
1．巴比妥HCl緩沖液（pH8.6，離子強度0.075)：稱取巴比妥鈉15.5g，加入1mol/LHCl12ml，混勻溶解，加蒸餾水至1000ml，此為電極緩沖液。
2．巴比妥-HCl緩沖液（pH8.6,離子強度0.05)：稱取巴比妥鈉10.3g,加入1mol/LHCI8ml，混勻www.med126.com溶解，加蒸餾水至1000ml，用于配瓊脂糖凝膠用。
3．0.8%瓊脂糖凝膠：取瓊脂糖0.8g，溶于配瓊脂糖凝膠的緩沖液100ml，置沸水煮溶或置于微波爐中熱溶解。
4．1%蘇丹黑B的石油醚-乙醇（1：4，V/V)溶液。
（三)操作
1．預(yù)染血清：吸血清0.2ml于一小試管中，再加蘇丹黑B染色液0.02ml及無水乙醇0.01ml�；靹蚝笾糜�37℃水溶預(yù)染20min。取出各管，2000r/min離心5min，以除去多余的染料。
2．瓊脂糖凝膠板制備：將0.8%瓊脂糖凝膠溶解后，吸2.5ml到載玻片上，趁熱將刻點樣槽用有機玻璃蓋放在距載玻片一側(cè)近1cm處。一塊載玻片前后可打兩個槽點兩份樣品。
3．點樣與電泳：取下凝膠上有機玻璃蓋并顯出一加樣小槽。取預(yù)染血清40μl，注入此小槽中。在電泳槽內(nèi)加入巴比妥電極緩沖液，樣品端為負極。以四層濾紙或沙布搭橋按10V/cm電泳，待預(yù)染血清電泳至最高或40min，切斷電源。
4．定量：
（1)切割比色法：將凝膠板上各脂蛋色帶分別切開置于裝入有3ml蒸餾水的試管內(nèi)。切相應(yīng)大小的空白瓊脂糖放入3ml蒸餾水試管內(nèi)，為空白管，各管放入沸水煮3min，瓊脂糖溶解，待冷，以空白管調(diào)零點，于660nm處比色，記錄吸光度，以α-、前β-和β-脂蛋白三條區(qū)帶吸光度總和，比各自區(qū)帶的吸光度，求其百分比。這種半定量方法不夠準(zhǔn)確，誤差很大。
（2)掃描定量：預(yù)染脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳畢，其瓊脂糖凝膠板上有色帶，可直接置于光密度掃描儀掃描，并得出各區(qū)帶的百分比，如果輸入該病人的血脂總量，即可算出α-、前β-和β-脂蛋白的各自含量，如圖16-2所示。
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圖16-2 血清脂蛋白電泳（瓊脂糖)
正常參考值（百分比)：
α-脂蛋白 25.7±4.1%
前β-脂蛋白 21.0±4.4%
β-脂蛋白 53.3±5.3%
注意事項：①血清樣品要新鮮；②為了免去離心步驟，吸取預(yù)染血清時，應(yīng)吸取上層，下層或管底可能有染料顆粒沉渣，否則應(yīng)再離心后吸預(yù)染血清。
