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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 > 理論教學(xué) > 基礎(chǔ)學(xué)科 > 免疫細(xì)胞與核酸分子雜交 > 正文:放射免疫分析法的建立
    

放射免疫分析法的建立

 

 。ǘ)放射免疫分析中造成測(cè)量誤差的因素

  誤差包括系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差。系統(tǒng)誤差發(fā)生在測(cè)量過程中由于儀器不準(zhǔn)、試劑不純、標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定等原因,使測(cè)定結(jié)果呈傾向性偏大或偏小,這種誤差應(yīng)力求避免。隨機(jī)誤差是測(cè)量過程中各種偶然因素造成的,沒有固定的傾向性,這類誤差是不可避免的,必要時(shí)做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

  造成誤差的可能來源有以下幾個(gè)方面:

  1.各種儀器:設(shè)備的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、效率以及被污染等情況帶來的誤差。如:①由于放射性測(cè)量?jī)x器的穩(wěn)定性、效率、樣品試管的材料和均勻性及被測(cè)物的放射性強(qiáng)度等原因。②由于樣品的自吸收,本底校正,測(cè)定時(shí)間,可能的污染等原因。③在試驗(yàn)室中所有的移液管、微量取樣器以及天平的刻度、校準(zhǔn)和使用方法等原因。④由于反應(yīng)試管、移液管以及測(cè)定用試管等表面清潔度和所引起的不同吸附等原因都可以對(duì)測(cè)定結(jié)果帶來誤差。

  2.試劑的純度、質(zhì)量和穩(wěn)定性的影響也是造成誤差的重要因素。如標(biāo)記抗原的比度、純度,輻射自分解,抗體的穩(wěn)定性,分離劑、阻斷劑及緩沖液等試劑的純度等。

  3.在放射免疫分析中一些基本操作,如取樣、提取、沉淀、分離以及保溫條件不適當(dāng)?shù)仍斐傻恼`差。由于工作人員熟練程度不同也常常帶來誤差,如操作移液管垂直程度、下流速度、吹氣與不吹氣等。工作人員草率、不按規(guī)程操作等也都可以造成誤差。

  4.樣品誤差。樣品的收集方法、貯存溫度、放置條件,微量樣品取樣的準(zhǔn)確度,樣品可能造成的污染以及樣品的變性(如免疫反應(yīng)活性的降低、蛋白質(zhì)的變性等)也都能造成測(cè)量的誤差。

  5.提取及層析分離過程中的丟失。

 。ㄈ)放射免疫分析中測(cè)量誤差的控制

  1.選擇準(zhǔn)確性高的方法:對(duì)各種方法進(jìn)行比較,淘汰粗糙及難以重復(fù)的方法。

  2.建立方法對(duì)比。用相同的測(cè)量方法和不同的測(cè)量方法在同一實(shí)驗(yàn)室和不同實(shí)驗(yàn)室,在同一地區(qū)和不同地區(qū),在同一時(shí)間和不同時(shí)間,對(duì)同一樣品進(jìn)行對(duì)比,檢查產(chǎn)生誤差的原因。

  3.建立各種類型的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)規(guī)定純度及制備方法,使用年限及貯存條件。

  4.建立操作規(guī)程,按章 操作。對(duì)使用的試劑、儀器設(shè)備要經(jīng)常檢查其有效性,更換試劑時(shí)應(yīng)進(jìn)行必要的鑒定,必要時(shí)對(duì)測(cè)定方法要做重復(fù)性試驗(yàn)和回收試驗(yàn)。

  5.建立可靠的檢查制度。經(jīng)常對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行核查,利用控制血清、標(biāo)準(zhǔn)血清檢查每批結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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