有關(guān)細(xì)胞和組織學(xué)技術(shù)

一、細(xì)胞和組織　　免疫組織化學(xué)技術(shù)是用標(biāo)記物或顯色物標(biāo)記的抗體檢測(cè)細(xì)胞和組織內(nèi)的抗原，從而達(dá)到診斷和研究疾病的目的。抗原的準(zhǔn)確顯示和定位與制備的細(xì)胞和組織標(biāo)本質(zhì)量的好壞有著密切的聯(lián)系。由于各種抗原的生化、物理性質(zhì)不同，如溫度高低、酸堿度強(qiáng)弱及各種化學(xué)試劑的作用均可影響抗原的免疫學(xué)活性，良好的細(xì)胞和組[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:47

抗原的制備

除完整的細(xì)胞可作為抗原外，各種不同的細(xì)胞內(nèi)存在的各種分子量不同的物質(zhì)，也都具有全抗原或半抗原的性質(zhì)，某種抗原物質(zhì)可能是某一類細(xì)胞所特有的，可作為這種細(xì)胞的一個(gè)標(biāo)志。由于細(xì)胞存在著許多性質(zhì)不同的抗原物質(zhì)，有時(shí)要從這眾多的物質(zhì)中提取、純化某種抗原物質(zhì)，以供科學(xué)研究之用�！　∫弧⒖乖奶崛　　】乖闹苽涫�[詳細(xì)]

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抗體的制備

一、抗血清的制備　　有了質(zhì)量好的抗原，還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩�，才能產(chǎn)生質(zhì)量好（特異性強(qiáng)和效價(jià)高）的抗體。　�。ㄒ唬┯糜诿庖叩膭�(dòng)物　　作免疫用的動(dòng)物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實(shí)驗(yàn)室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動(dòng)物種類的選擇主要根據(jù)抗原的生物學(xué)特性和所要獲得抗血清數(shù)量，如[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:46

抗體的提取與純化

精制免疫球蛋白的方法很多。一般采用綜合技術(shù)，避免蛋白變性。如分離IgG時(shí)，多結(jié)合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應(yīng)用凝膠過(guò)濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過(guò)濾等�！　∫弧Ⅺ}析法　　取x ml血清加x ml生理鹽水，于攪拌下逐滴加入2x ml飽和硫酸銨，硫酸銨的終飽和度為5[詳細(xì)]

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免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，是由Coons等（1950）建立，經(jīng)過(guò)近43年的發(fā)展，免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)。它與親合化學(xué)技術(shù)如葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素與卵白素、植物血凝素（ConA等）相結(jié)合拓寬了領(lǐng)域；與激光技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)和[詳細(xì)]

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免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的原理

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看[詳細(xì)]

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熒光抗體的制備

熒光抗體是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的重要技術(shù)之一，制備高特異性和高效價(jià)的熒光抗體必須選用高質(zhì)量的熒光素和高特異性高效價(jià)的免疫血清�！　∫�、熒光素　　熒光是指一個(gè)分子或原子吸收了給予的能量后即刻引起發(fā)光，停止能量供給，發(fā)光也瞬時(shí)停止（一般持續(xù)10-7～10-8s）。可以產(chǎn)生明亮熒光的染料物質(zhì)，稱熒光色素。目前[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:40

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色方法

一、標(biāo)本制作　　可制作涂片、印片、細(xì)胞單層培養(yǎng)物、組織切片，經(jīng)適當(dāng)固定或不固定，作免疫熒光染色用�！　《晒饪贵w染色方法　�。ㄒ唬┲苯臃ā　�1．染色 切片經(jīng)固定后，滴加經(jīng)稀釋至染色效價(jià)如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人IgG或IgA熒光抗體等），在室溫或37℃染色30[詳細(xì)]

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熒光顯微鏡檢查法

一、熒光顯微鏡　　熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過(guò)物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像（圖3-15）。圖3-15　熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)和主要部件　�。ㄒ唬┕庠础　‖F(xiàn)在多采用200W的超高壓汞燈作光源，它是用石[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:40

非特異性染色的消除方法

一、非特異性染色的主要因素　　組織的非特異性染色的機(jī)理很復(fù)雜，其產(chǎn)生的原因主要可分為以下幾點(diǎn)：　�。�1）一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。　�。�2）抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結(jié)合�！　。�3）除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:40

免疫酶細(xì)胞化學(xué)

免疫酶細(xì)胞化學(xué)是免疫細(xì)胞化學(xué)（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應(yīng)存在的前提條件下，借助于酶細(xì)胞化學(xué)的手段，檢測(cè)某種物質(zhì)（抗原/抗體）在組織細(xì)胞內(nèi)存在部位的一門新技術(shù)：即預(yù)先將抗體與酶連結(jié)，再使其與組織內(nèi)特異抗原反應(yīng)，經(jīng)細(xì)胞化學(xué)染色后，于光鏡或電[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:36

固定和切片

一、固定　　若想得到理想的ICC染色結(jié)果、正確地判斷抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞內(nèi)的位置，除需有良好酶和抗體外，保持組織細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的不動(dòng)性（Immobility）和免疫活性也是至關(guān)重要的。換言之，如果抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞間彌散、丟失或失去免疫活性，無(wú)論如何努力染色都是徒勞的，所以說(shuō)固定是ICC染色中非常重要[詳細(xì)]

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染色方法

一、本科標(biāo)抗體法　　酶標(biāo)抗體技術(shù)是通過(guò)共價(jià)鍵將酶連結(jié)在抗體上，制成酶標(biāo)抗體，再借酶對(duì)底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，于光鏡或電鏡下進(jìn)行細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)各種抗原成分的定位�！　。ㄒ唬┟傅姆N類及特點(diǎn)　　從理論上講，用細(xì)胞化學(xué)方法能顯示的酶，均可用于標(biāo)記抗體，進(jìn)行ICC染[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:35

結(jié)果分析

ICC染色結(jié)果判斷與其它組織化學(xué)相似，應(yīng)在熟悉所應(yīng)用方法、抗體的優(yōu)點(diǎn)和局限性的基礎(chǔ)上，避免主觀意識(shí)，進(jìn)行客觀判斷。一般認(rèn)為在嚴(yán)格操作、控制染色的條件，選擇特異性抗體等條件下，所得結(jié)果是陽(yáng)性時(shí)才有積極意義。而陰性時(shí)，不一定意味著該物質(zhì)或抗原不存在，即不能排除實(shí)驗(yàn)過(guò)程所致的抗原丟失或抗體選擇不當(dāng)?shù)纫鹑?font style="color:#FF6600">[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:34

免疫細(xì)胞化學(xué)的幾種特殊應(yīng)用

近年免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在下述方面的應(yīng)用令人注目，有著廣闊的前景�，F(xiàn)介紹如下：　　　一、ICC在鋪片中應(yīng)用　　鋪片（Whole Mount Stretch Preparation） 是研究神經(jīng)分布應(yīng)用較早、較廣的方法。19世紀(jì)末，Dogiel和Cajal等利用鋪片技術(shù)，結(jié)合鍍銀及甲基藍(lán)染色，觀察腸道神經(jīng)[詳細(xì)]

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免疫金技術(shù)發(fā)展史

早在一個(gè)世紀(jì)以前，化學(xué)家就對(duì)膠體金進(jìn)行了研究，當(dāng)時(shí)只是研究它的結(jié)構(gòu)和金屬性質(zhì)。在1939年Kausche和Ruska把煙草花葉病毒吸附到金顆粒上在電子顯微鏡下觀察見(jiàn)金離子呈高電子密度。然而膠體金技術(shù)作為標(biāo)記物應(yīng)用于免疫組織化學(xué)研究是在1971年，F(xiàn)aulk 和Taylor首先將兔抗沙門氏菌抗血清與膠[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:31

溶膠的基本概念

一、膠體金　　即金的水溶液，它也具有一般溶膠的特性。分散體系的分類：體系就是一定空間范圍內(nèi)作為我們研究對(duì)象的物質(zhì)，某一種或幾種物質(zhì)分散到另一種物質(zhì)中所組成的體系叫做分散體系。被分散相質(zhì)點(diǎn)的大小而改變，因此，按分散相質(zhì)點(diǎn)的大小不同，可將分散體系分為三類。　�。ㄒ唬╇x子分散體系　　指分?jǐn)?shù)散相以小分子或離[詳細(xì)]

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膠體金的制備方法

膠體金溶液的制備有許多種方法，其中最常用的是化學(xué)還原法，基本的原理是向一定濃度的金溶液內(nèi)加入一定量的還原劑使金離子變成金原子。目前常用的還原劑有：白磷、乙醇、過(guò)氧化氫、硼氫化鈉、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等，下面分別介紹制備不同大小顆粒的膠體金溶液�！　∫�、制備膠體金的準(zhǔn)備　�。ㄒ唬┎Ａ髅蟮那鍧崱　�[詳細(xì)]

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膠體金的質(zhì)量鑒定

膠體金制備完畢后須經(jīng)電鏡下質(zhì)量鑒定才能應(yīng)用�！　∫弧⒛z體金顆粒直徑測(cè)定　　用預(yù)先處理好的覆有Formvar膜的鎳網(wǎng)浸入膠體金溶液內(nèi)，取現(xiàn)放在空氣中干燥或37℃烤箱烤干。然后在透射電鏡下觀察，主要觀察金顆粒的大小，符合不符合所需要的顆粒直徑，金顆粒是否均勻一致，有無(wú)橢圓形及多角形金顆粒存在。理想的金顆[詳細(xì)]

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膠體金標(biāo)記物的制備

膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)的原理，一般認(rèn)為是由于pH值等于或稍偏堿于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)呈電中性，此時(shí)蛋白質(zhì)分子與膠體金顆粒相互間的靜電作用較小，但蛋白質(zhì)分子的表面張力卻最大，處于一種微弱的水化狀態(tài)，較易吸附于金顆粒的表面，由于蛋白質(zhì)分子牢固地結(jié)合在金顆粒的表面，形成一個(gè)蛋白層，阻止了膠體金顆粒的相互接觸，[詳細(xì)]

2007/12/3 11:02:31