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臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué):第十二章 陰道分泌物檢查

第一節(jié) 標(biāo)本的采集陰道分泌物(vaginaldischarge)為女性生殖性系統(tǒng)分泌的液體,俗稱“白帶”。主要來(lái)自宮頸腺體、前庭大腺,此外還有子宮內(nèi)膜、陰道粘膜的分泌物等。陰道標(biāo)本采集前24小時(shí),禁止性交,盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部是藥等,以名勝影響檢查結(jié)果。取材…

第一節(jié) 標(biāo)本的采集

陰道分泌物(vaginaldischarge)為女性生殖性系統(tǒng)分泌的液體,俗稱“白帶”。主要來(lái)自宮頸腺體、前庭大腺,此外還有子宮內(nèi)膜、陰道粘膜的分泌物等。

陰道標(biāo)本采集前24小時(shí),禁止性交,盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部是藥等,以名勝影響檢查結(jié)果。取材所用消毒的刮板,吸管或棉拭子必須清潔干燥,不粘有任何化學(xué)藥品或潤(rùn)滑劑。陰道窺器插入前必要時(shí)可用少許生理鹽水濕潤(rùn)。根據(jù)不同的檢查目的可自不同部位取材。一般采用鹽水浸濕的棉拭子睚陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材,制備成生理鹽水涂片以觀察陰道分泌物。生理鹽水懸滴可檢查滴蟲(chóng),涂制成薄片以95%乙醇固定,經(jīng)過(guò)巴氏染色,吉姆薩染色升革蘭氏染色,進(jìn)行腫瘤細(xì)胞篩查或病原微生物檢查。

第二節(jié) 外觀及清潔度檢查

在生量狀態(tài)下,女性生殖系統(tǒng)由于陰道的組織解剖學(xué)和生物化學(xué)特點(diǎn)足以防御外界病原微生物的侵襲。從新生兒到青老大爺期,雙側(cè)大小陰唇合攏嚴(yán)緊,外女膜完整,陰道前后壁貼接,使管腔閉合,以青春期后,由于雌激素的影響,陰道上的上皮由單層變?yōu)閺?fù)層。上皮細(xì)胞內(nèi)底層外,均含有不同量的糖原,同時(shí)受卵巢功能的影響,有周期的變化及脫落,脫落后細(xì)胞破壞放出糖原,借陰道桿菌作用,將糖原轉(zhuǎn)化為乳酸,使陰道PH保持在4-4.5之間,只有陰道桿菌能在此環(huán)境中生存。因此在正常健康婦女,陰道本身有自凈作用,形成自然防御功能。

一、一般性狀檢查

檢查正常陰道分泌物為白色稀糊狀,一般無(wú)氣味,量多少不特恙雌激素水平高低及生殖器官充血情況有關(guān),于近排卵期白帶量多,清澈透明、稀薄似雞旦清,排卵期2-3天后白帶混濁粘稠、量少、行經(jīng)前量又增加。妊娠期白帶量較多。

白帶異?杀憩F(xiàn)為色、質(zhì)、量的改變:

1.大量無(wú)包透明粘白帶常見(jiàn)于應(yīng)用雌激素藥物后及卵巢顆粒細(xì)胞瘤時(shí)。

2.膿性白帶:黃色或綱綠色有臭味,多為滴蟲(chóng)或化膿性細(xì)菌性感染引起的;泡沫疚狀膿性白帶,常見(jiàn)于滴蟲(chóng)性陰道炎;其它膿性白帶見(jiàn)于慢性宮頸炎老年性陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、宮腔積膿、陰道異物等。

3.豆腐渣樣白帶:呈豆腐查樣或凝乳狀小碎塊,為念珠菌陰道炎所特有,常伴有外陰瘙癢。

4.血性白帶:內(nèi)混有血液,血量多少不定,有特殊臭味。對(duì)這類白帶應(yīng)警惕惡性腫瘤的可能,如宮頸癌、宮體癌等,有時(shí)某些宮頸息肉、子宮粘膜下肌瘤、老年性陰道炎、重度慢性宮頸炎和宮內(nèi)節(jié)育器引起的副反應(yīng)也可在m.quanxiangyun.cn/hushi/白帶中見(jiàn)到血液。

5.黃色水樣白帶:由于病變組織的變性、環(huán)死所致。常發(fā)生于子宮粘膜下肌瘤,宮頸癌、子宮體癌、輸卵管癌等。

二、清潔度檢查

將陰道分泌物加生理鹽水作涂片,用高倍鏡檢查,主要依靠白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、陰道桿菌與雜菌的多少劃分清潔度,見(jiàn)表12-1。

表12-1 陰道分泌物清潔度分級(jí)

清潔度所見(jiàn)成分臨床意義
Ⅰ度大量陰道桿菌和上皮細(xì)胞,白細(xì)胞0-5/HPF,雜菌無(wú)或極少正常
Ⅱ度中等量陰道桿菌和上皮細(xì)胞,白細(xì)胞10-15/HPF,雜菌少量亦屬正常
Ⅲ度少量陰道桿菌和上皮細(xì)胞,白細(xì)胞15-50/HPF,雜菌較多提示有炎癥
Ⅳ度無(wú)陰道桿菌有少量上皮細(xì)胞,白細(xì)胞>30/HPF,大量雜菌多見(jiàn)于嚴(yán)重的陰道炎

卵巢功能不足、雌激素減低,陰道上皮增生較差時(shí)可見(jiàn)到陰道桿菌減少,易感染雜菌。單純清潔度不好而未發(fā)現(xiàn)病原微生物,為非特異性了道炎。當(dāng)清潔度為Ⅲ~Ⅳ度時(shí)?赏瑫r(shí)發(fā)現(xiàn)病原微生物,提示存在感染引起的陰道炎。

第三節(jié) 微生物檢查

(一)原蟲(chóng)

引起陰道感染的原蟲(chóng)主要有是陰道毛滴蟲(chóng),可致滴蟲(chóng)性陰道炎。病人外陰灼熱痛、瘙癢,陰道分泌物呈稀膿性或泡沫狀,將此分泌物采用生理鹽水懸滴法置于低倍顯微鏡下觀察,可見(jiàn)波動(dòng)狀或螺旋狀運(yùn)動(dòng)的蟲(chóng)體將周圍白細(xì)胞或上皮細(xì)胞推動(dòng)。在高倍鏡下可見(jiàn)蟲(chóng)體為8-45μm,呈項(xiàng)寬尾尖倒置梨形,大小多為白細(xì)胞的2-3倍,蟲(chóng)體項(xiàng)端有前鞭毛4根,后端有后鞭毛一根,體側(cè)有漢動(dòng)膜,借以移動(dòng)。此時(shí)陰道分泌物的清潔度為Ⅲ、Ⅳ度。

陰道貌岸然毛滴蟲(chóng)生長(zhǎng)繁殖的適宜溫度為25-42攝氏度,故在檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意保溫,方可觀察到陰道毛滴蟲(chóng)的活動(dòng)。陰道分泌物中查到陰道分泌物滴蟲(chóng)是診斷滴蟲(chóng)性陰道炎的依據(jù),近年來(lái)采用陰道毛滴蟲(chóng)單抗制的膠乳免疫凝聚法劑盒可提高滴蟲(chóng)性陰道炎的診斷率。

在陰道分泌物中見(jiàn)到溶組織阿米巴滋養(yǎng)體時(shí),提示為阿米巴性陰道炎。

(二)真菌

陰道真菌有時(shí)在陰道中存奪而無(wú)害,在陰道抵抗力減低時(shí)容易發(fā)病,真菌性陰道炎發(fā)找到真菌為診斷依據(jù),陰道真菌多為白色假絲酵母菌,偶見(jiàn)陰道纖毛菌、放線菌等。采用懸滴法于低倍鏡下可見(jiàn)到白色絲假酵母菌的卵圓形孢子和假菌絲。如取陰道分泌物涂片并時(shí)行革蘭氏染色后油觀察,可見(jiàn)到卵圓形革蘭氏陽(yáng)性孢子或與出芽細(xì)胞相連接的假菌絲,成鏈狀及分支狀。

(三)淋病奈瑟菌

淋病是目前世界上發(fā)病率較高的性傳播疾病之一。國(guó)內(nèi)統(tǒng)計(jì)約占門(mén)診性病患者的40%。人類是淋病奈瑟菌唯一的宿主。在性關(guān)系紊亂情況下造成在人群中的廣泛傳染及流行。臨床上多婁箐南現(xiàn)急性癥狀,少數(shù)為慢性過(guò)程。淋病奈瑟菌的檢查首先采用涂片法,發(fā)宮頸管內(nèi)分泌物涂片的陽(yáng)性率最高,為100%;陰道上1/3部分為84%;陰道口處為35%。一般需將宮頸表面膿液試去,用棉拭子插入宮頸管1厘米深處停留10-30s,旋轉(zhuǎn)一周取出,將分泌生yin在玻片上,革蘭氏染色后油鏡檢查,找革蘭氏陰道性雙球菌,形似腎或咖啡豆?fàn),凹面相?duì),除散在于白細(xì)胞之間外,還可見(jiàn)其被吞噬于中性粒細(xì)胞胞質(zhì)之內(nèi),因淋病奈瑟菌對(duì)各種理化因子抵抗力弱,涂片法可被漏診,必要時(shí)可進(jìn)行淋病奈瑟菌培養(yǎng),且有利于菌株分型和藥過(guò)敏試驗(yàn)。近年來(lái)采用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)的淋病抗血清,可與受檢查者宮頸分泌物中的淋病奈瑟菌結(jié)合,采用免疫熒光技術(shù),在30分鐘內(nèi)即可準(zhǔn)確得出結(jié)果。比培養(yǎng)法快,比涂片支準(zhǔn)確,較易掌握。此外運(yùn)用PCR技術(shù)也可對(duì)淋病奈瑟菌過(guò)少,雜菌過(guò)多的標(biāo)本進(jìn)行診斷。

對(duì)于淋病非顯性感染者,其淋病奈瑟菌的鏡檢出和培養(yǎng)檢查常為陰性,但卻是淋病的重要傳染源。為此,近年來(lái)制備了多種檢測(cè)淋病奈瑟菌的基因探針。大部分淋病奈瑟菌內(nèi)含有多拷貝的4。2kb隱蔽性質(zhì)粒,此外淋病奈瑟菌青毒素抗性主要是由編碼β-骨酰胺酶的質(zhì)粒決定的,用這兩種質(zhì)粒標(biāo)記的探針與陰道分泌物進(jìn)行斑點(diǎn)雜交可分別探測(cè)淋病奈瑟菌及其抗藥性。其特異性敏感性均很高。目前還制備出淋病奈瑟菌DNA探針、菌毛探針和RNA探針,也建立了各種特異性高,敏感性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速的右面放射性標(biāo)記的檢測(cè)系統(tǒng),成為淋病奈瑟菌及其抗藥性檢查的重要方法。

(四)陰道加德鈉菌

陰道加德鈉菌(Gardherellavaginalis;GV)和某些厭氧菌共同引起的細(xì)菌性陰道病亦屬于性傳播疾病之一。該菌還能以非性行為方式傳播。除引起陰道病外,尚可引起早產(chǎn)、產(chǎn)褥熱、新生兒敗血癥、絨毛膜羊膜炎、不后敗血癥和膿毒血癥等。陰道加德鈉菌產(chǎn)生高濃度的丙酮酸的氨基酸,可被陰道厭氧菌群脫羧基生成相應(yīng)的胺,引起皮膚粘膜過(guò)敏。血管通透性增加,上皮細(xì)胞脫落,陰道分泌物呈奶油狀大量排出,有惡臭;颊哧幍婪置谖锔锾m氏染色后可見(jiàn)陰道性或染色不定有時(shí)可染成革蘭氏陽(yáng)性的小桿菌。大小為(1.5-2.5)μm×0.5μm,具有多形性,呈桿狀或球桿狀,陰道分泌物PH常大小4.5,胺試驗(yàn)陽(yáng)性。

除對(duì)陰道加德鈉菌形態(tài)學(xué)鑒別外,還可進(jìn)行陰道菌群檢查,由于細(xì)菌性陰道貌岸然病時(shí)乳酸桿菌減少,加德鈉氏菌的厭氧菌增加,可計(jì)算乳酸桿菌和加德鈉菌的數(shù)量變化,作為本病診斷參考。一般取陰道分泌物涂片,革蘭氏染色,用油鏡觀察3-5個(gè)視野,計(jì)算各種菌的數(shù)量。乳酸性桿菌為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌,(1-5)μm×1μm,常成雙,單根、鏈狀或柵狀排列,非細(xì)菌性陰道病乳酸桿菌>5個(gè)/油視野僅見(jiàn)少許加德鈉菌。細(xì)菌性陰道病不僅可見(jiàn)到加德鈉菌,還有其它革蘭氏陰性或陽(yáng)性桿菌,無(wú)乳酸桿菌或小于5個(gè)/油鏡視野。

尋找陰道分泌物中的線索細(xì)胞,是診斷加德鈉菌性陰道貌岸然病的重要指標(biāo)。線索細(xì)胞為陰道鱗狀上皮細(xì)胞粘附多數(shù)加德鈉菌所致生理鹽水涂片可見(jiàn)該細(xì)胞邊緣呈現(xiàn)鋸齒狀。細(xì)胞已有溶解,核模糊不清,其上附著大量加德鈉菌及厭氧菌,使其表面毛糙,有斑點(diǎn)和大量的細(xì)小顆粒,亦右用吖啶橙染色法或相差顯微鏡觀察法檢查線索細(xì)胞。此外還可用培養(yǎng)、熒光板、氣-液色譜分析和PCR方法等助診。

(五)衣原體

泌尿生殖道沙眼衣原體感染是目前很常見(jiàn)的性傳播疾病之一,國(guó)外報(bào)道生殖道感染率為10。8%,由于感染后無(wú)特異癥狀,易造成該病流行,引起子性急性陰道炎和宮頸炎。及原體感染的白帶膿性粘液,與細(xì)菌感染的膿性白帶不同。取膿性分泌物涂片,吉姆薩染色,有進(jìn)時(shí)可見(jiàn)到細(xì)胞內(nèi)包涵體,但陽(yáng)性率很低。過(guò)去采用傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)分離衣原體的方法,技術(shù)難度大,特異性敏感性均不理想,且費(fèi)時(shí)費(fèi)錢。目前應(yīng)用較多的是熒光標(biāo)記的單克隆抗體的直接熒光抗體法,可快速確定系何種血清型衣原體敏感。80年代發(fā)民展的DNA探針技術(shù),可將陰道分泌物經(jīng)PBS稀解,離心后沉淀物經(jīng)蛋白求恩酶K水解,酚/氯仿抽提等處理后與沙眼衣原體探針,如外膜蛋白基因的高度保守序列,或TE-55DNA探針等進(jìn)行斑點(diǎn)雜交,可檢出沙眼衣原體的15個(gè)血清型,而與其它細(xì)菌,病毒、立克次體等無(wú)交叉反應(yīng),敏感性和特異性均為95%左右。DNA探針?lè)椒▽?duì)泌尿生殖道衣原體疾病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和無(wú)癥狀衣原體攜帶者的診斷很有意義。

(六)病毒

在人類性傳播疾病中有相當(dāng)一部分是由病毒引起的?蓮年幍婪置谖镏袡z測(cè)的病毒有:

1.單純皰疹病毒(herpes simplex virus,HSV)有二個(gè)血清型,HSV-I和HSV-Ⅱ型。引起的生殖道感染的以Ⅱ型為主,約占85%。表南為生殖器官皰疹,潰瘍并通過(guò)胎盤(pán)引起胎兒感染,發(fā)生死胎、流主和畸形。實(shí)驗(yàn)診斷多取病損處分泌物涂片進(jìn)生細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、病毒培養(yǎng)或熒光抗體檢測(cè)。在孕期感染的監(jiān)測(cè)中,可采取宮頸部位分泌物做包涵體檢查。單純皰疹病毒以侵犯軍團(tuán)頸鱗狀上皮多見(jiàn)。感染早期細(xì)胞輕度或中度增大,核呈嗜堿性不透明的勻質(zhì)狀毛玻璃樣外觀,偶伴有核空泡化。由于核的增殖與胞質(zhì)腫大而形成多核或巨大細(xì)胞。感染晚期可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核內(nèi)有嗜伊紅包涵體,周圍有透明暈,由于陰道分泌物檢查陽(yáng)性率低,病毒培養(yǎng)操作復(fù)雜費(fèi)時(shí),近年來(lái)對(duì)HSV的檢查主要采用熒光抗體檢查或分子生物方法診斷,特別是利用HSV基因組中特異性強(qiáng)的DNA片段棗HSV-I和HSV-Ⅱ,胸腺激酶的寡核苷酸探針和RNA探針進(jìn)行分子雜交,可快速而靈敏地對(duì)HSV感染作出診斷。

2.人巨細(xì)胞病毒(human cytmegalovirus,HCMV)是先天感染的主要病原。一次感染后終年潛伏于體內(nèi),在機(jī)體免疫力低下時(shí)病毒激活,可表現(xiàn)為巨細(xì)胞包涵體病。孕期胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到侵犯可致小頭畸形、智力低下、視聽(tīng)障礙等后遺癥。故孕婦陰道分泌物巨細(xì)胞病毒檢查對(duì)孕期監(jiān)測(cè)尤其是重要的,常用宮頸拭子采取分泌物送檢。HCMV實(shí)驗(yàn)室診斷方法除傳播病毒離法外,光鏡檢測(cè)包涵體陽(yáng)性就緒極低,電鏡可直直接見(jiàn)到典型的皰疹病毒類形態(tài)結(jié)構(gòu),但無(wú)特異性,目前可采用CC-ABC法,即將標(biāo)本接種于人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞,使病毒在敏感細(xì)胞中增殖,培養(yǎng)2天后收獲,再用針對(duì)HCMV早期抗原的單克隆抗體,利用生物素親和素放大作用染色鑒定。亦可用HCMV、DNA片段或RNA探針與樣品進(jìn)行斑點(diǎn)雜交,夾心雜交或 PCR后勤部的分子雜交來(lái)檢測(cè),臨床最常用的方法是用ELISA法檢測(cè)孕婦血清 HCMV-IGM來(lái)診斷活動(dòng)性感染。

3.人乳頭狀病毒(human papillomavirus,HPV)HPV目前鑒別有50余型。引起婦性生殖道感染的有23型,其中最主要的有6,11,16,18,31,33,型。HPV感染細(xì)胞后細(xì)胞的作用的主要表現(xiàn)為:①增殖感染,即病m.quanxiangyun.cn/zhicheng/毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制,產(chǎn)生感染子代致使細(xì)胞死亡。②細(xì)胞轉(zhuǎn)化,引起腫瘤發(fā)生,主要是引起生殖道鱗狀上皮肉瘤樣變,如16,18,31,33,35,29,型,尤其是宮頸癌患者以檢查出16,18型為多見(jiàn)。HPV檢測(cè)亦可采用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)、分泌物涂片、光鏡檢測(cè)。HE染色可見(jiàn)核周空暈!皻馇驑印辈《靖腥究张菁(xì)胞,但陽(yáng)性率很低。下生殖道狀贅生物者?蛇M(jìn)行病理學(xué)鏡可電鏡檢查,可崢到典型的病毒感染細(xì)胞或閏毒顆粒。目前常采用ABC法以抗HPV為一抗,生物素標(biāo)記的羊抗兔IGG為二抗檢測(cè)病毒抗原;虿捎貌《鞠鄳(yīng)的寡核苷酸探針,與陰道分泌物中提取的DNA進(jìn)行斑點(diǎn)雜交或夾心雜交進(jìn)行檢測(cè)。如采用PCR技術(shù)則可檢測(cè)極微量的HPV(即106個(gè)細(xì)胞中有一個(gè)感染細(xì)胞)

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