IgE和IgG4(以下只用IgE代表)是介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的抗體,因此檢測血清總IgE和特異性IgE對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的診斷和過敏原的確定很有價值。
一m.quanxiangyun.cn/shiti/、總IgE的測定
(一)測定方法
正常情況下血清IgE僅在ng/ml水平,用常規(guī)測定IgG或IgM的凝膠擴(kuò)散法檢測不出IgE,必須用高度敏感的放射免疫測定法及酶聯(lián)免疫測定法進(jìn)行檢測。
1.放射免疫吸附劑試驗(radioimmunosorbenttest,IRST)是將抗IgE吸附到固相載體上用以檢測血清IgE的方法,故又稱固相放射免疫測定(SPRIA);臨床常用雙抗體夾心法,多以濾紙為載體。將抗IgE抗體偶聯(lián)到經(jīng)溴化氟活化的濾紙上,使其與待檢血清及IgE參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行反應(yīng);洗滌后加入125I標(biāo)記的抗人IgE,再經(jīng)洗滌后測定濾紙片的放射活性,其測定值與標(biāo)本中的IgE含量呈正相關(guān)。
2.酶聯(lián)免疫測定法測定血清IgE時也常用雙抗體夾心ELISA法(詳見第十五章),操作方便,敏感性也很高,在臨床上經(jīng)常應(yīng)用。
3.間接血凝試驗用抗IgE至敏紅細(xì)胞,將標(biāo)本血清做系列稀釋后與致敏紅細(xì)胞反應(yīng)。此法更加簡便易行,便于普及,但敏感性比上兩法稍低。
(二)臨床意義
血清總IgE水平一般用國際單位(IU)或ng表示,1IU=2.4ng,相當(dāng)于WHO標(biāo)準(zhǔn)凍干血清制劑0.00928mg內(nèi)所含的IgE量。正常人群IgE水平受環(huán)境、種族、遺傳、年齡、檢測方法及取樣標(biāo)準(zhǔn)等因素的影響,以致各家報道的正常值相差甚遠(yuǎn)。嬰兒臍帶血IgE水平小于0.5IU/ml,出生后隨年齡增長而逐漸升高,12歲時達(dá)成人水平。成人血清IgE水平約在20~200IU/ml之間,一般認(rèn)為大于333IU/ml(800ng/ml)時為異常升高。
IgE升高相關(guān)的常見疾病有:過敏性哮喘、季節(jié)性過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、藥物性間質(zhì)性肺炎、支氣管肺曲菌病、麻風(fēng)、類天皰瘡及某些寄生蟲感染等。上述疾病時IgE升高的程度并不一致,在過敏性支氣管肺曲菌病時最為顯著,其值可達(dá)5000~20000ng/ml,除了此病和特應(yīng)性皮炎以及在花粉季節(jié)之外,任何血清總IgE水平大于5000ng/ml的患者均應(yīng)考慮寄生蟲感染的可能性。
二、特異性IgE的測定
(一)測定方法
特異性IgE是指能與某種過敏原特異性結(jié)合的IgE,因此需要用純化的變應(yīng)原代替抗IgE進(jìn)行檢測;常用的方法仍然是放射免疫技術(shù)和酶標(biāo)免疫技術(shù)。
1.放射變應(yīng)原吸附劑試驗(radioallergosorbenttest,RAST)將純化的變m.quanxiangyun.cn/rencai/應(yīng)原與固相載體結(jié)合,加入待檢血清及參考對照,再與同位素標(biāo)記的抗IgE抗體反應(yīng),然后測定固相的放射活性,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求出待檢血清中特異性IgE的含量,或在標(biāo)本放射活性高于正常人均數(shù)加3S時判為陽性。
2.酶聯(lián)免疫測定法試驗原理及步驟基本同RAST,僅是最后加入酶標(biāo)記的抗IgE,利用酶底物進(jìn)行顯色。測定結(jié)果的表示也與RAST相同。
(二)臨床意義及評價
RAST是目前公認(rèn)的檢測型變態(tài)反應(yīng)的有效方法之一,具有特異性強(qiáng)、敏感性高、影響因素少、對患者絕對安全等優(yōu)點;不但有助于過敏性哮喘的診斷,對尋找變應(yīng)原也有重要價值。RAST與皮膚試驗和支氣管激發(fā)試驗的符合率在80%左右,但不能完全代替后兩種試驗,因為活體試驗還能反映嗜堿性粒細(xì)胞和靶細(xì)胞的反應(yīng)性。
但是RAST也有許多缺點:費用昂貴、花費時間長、放射性同位素易過期而且污染環(huán)境、不同來源試劑盒的參比血清不同而不易相互比較、待檢血清含有相同特異性IgG時可干擾正常結(jié)果。因此一般只在下列情況下才做RAST:①皮試結(jié)果難以肯定、但需提供進(jìn)一步的診斷證據(jù)者;②不適宜做皮試或激發(fā)試驗者,例如老年、幼兒、妊娠婦女、患有皮膚病、對變應(yīng)原有嚴(yán)重過敏史或正服用抗過敏藥物以及重病者;③觀察脫敏治療效果或研究變態(tài)反應(yīng)機(jī)制。
ELISA法與RAST有相似的優(yōu)點,而且還有獨特的長處,如沒有同位素污染、酶標(biāo)抗體可長期保存,因此在國內(nèi)應(yīng)用較多。用ELISA測試屋塵和一些花粉的結(jié)果與RAST符合率較高,且與臨床也較符合,但與皮膚試驗的符合率可能不夠理想。