實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué):第五節(jié)　無(wú)胸腺裸鼠特點(diǎn)及應(yīng)用

一、裸鼠的基本概念和發(fā)展情況

（一)基本概念

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常。

小鼠中有若干突變基因，它可產(chǎn)生一種為無(wú)毛的表現(xiàn)型（phenotype)，例如無(wú)胸腺裸鼠（Nude、)裸鼠（Naked)、無(wú)毛鼠（Hairless)、無(wú)鼻毛鼠（Rhinol)，不要把這些突變鼠基因相互混淆。裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表現(xiàn)型，因此，不能將“裸鼠”與“無(wú)毛鼠”兩詞交換使用。

現(xiàn)代免疫學(xué)的發(fā)展，指示了胸腺為中樞性免疫器官，揭示了胸腺和胸腺依賴淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞)的功能，這是免疫學(xué)的重大突破，開(kāi)創(chuàng)了細(xì)胞免疫的新途徑。無(wú)胸腺裸體鼠是研究胸腺功能最適宜的天然動(dòng)物模型，它的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，大大促進(jìn)了實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)研究的發(fā)展。

（二)裸鼠的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展情況

1962年英國(guó)格拉斯哥醫(yī)院Grist在非近交系的小鼠中偶然發(fā)現(xiàn)有個(gè)別無(wú)毛小鼠。四年后，愛(ài)丁堡動(dòng)物研究所沸拉那根（Flanagan)又證實(shí)這種無(wú)毛小鼠是由于染色體上等位基因突變引起的，發(fā)現(xiàn)該種鼠皮膚組織學(xué)和以往無(wú)毛小鼠不同，檢查發(fā)現(xiàn)，常因染色體退化，有一種新的無(wú)毛基因，因此，認(rèn)為是一種新的自發(fā)突變種，并命名為“裸體”（Nude)小鼠，用“nu”表示為基因符號(hào)，但當(dāng)時(shí)未被人們注意。1968年佩蒂路易斯（Pantelouris)發(fā)現(xiàn)裸體小鼠沒(méi)有胸腺，這才引起世界各國(guó)醫(yī)學(xué)生物學(xué)工作者的極大興趣。在這以前，為開(kāi)展細(xì)胞免疫學(xué)的研究，通常采用藥物抑制小鼠T細(xì)胞的產(chǎn)生及其作用，或使用外科手術(shù)摘除胸腺，這些方法往往由于抑制作

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News的報(bào)告，除用“nu”基因?qū)�入近交小鼠的方法成功地培育成千余種遺傳背景明確的裸鼠外，還培育了無(wú)胸腺肥胖裸鼠，無(wú)胸腺無(wú)脾臟裸鼠以及裸體大鼠等，預(yù)計(jì)不久的將來(lái)，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需要，將會(huì)培育出更多的無(wú)胸腺雜交品系。目前，已成立了國(guó)際性專門(mén)組織一國(guó)際裸鼠管理及應(yīng)用委員會(huì)，并分別在1973年、1976年1979年召開(kāi)了三次裸鼠會(huì)議。我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作者過(guò)去在小鼠的大量繁殖中也曾發(fā)現(xiàn)過(guò)無(wú)毛小鼠，但未進(jìn)行研究。最近三、四年來(lái)，由于科研工作的需要從國(guó)外引起了裸鼠。1978～1980年間，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院所屬單位曾先后從法國(guó)、英國(guó)、美國(guó)獲得裸鼠。北京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所在1980年從日本引進(jìn)裸鼠鼠種進(jìn)行了繁殖，飼料在屏障室內(nèi)，經(jīng)過(guò)16個(gè)月的飼料，繁殖正常，并已提供給科研工作使用。

二、裸鼠的主要形態(tài)和生理特征

裸鼠的主要特征表現(xiàn)為無(wú)毛（Hairless)、裸體（Nacked)和無(wú)胸腺（Athymus)。

原種新生裸體小鼠以

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脾臟和其它組織和淋巴原始細(xì)胞成熟為具有細(xì)胞免疫活性的T淋巴細(xì)胞，從而發(fā)揮免疫作用。裸鼠先天性無(wú)胸腺，抑制T細(xì)胞時(shí)IgM與抗原反應(yīng)是有不同爭(zhēng)論的，而在無(wú)輔助T細(xì)胞時(shí)就完全沒(méi)有IgG和IgA反應(yīng)。

裸鼠T淋巴系統(tǒng)功能可采用多種免疫功能檢查方法來(lái)證明。例如用地鼠的紅細(xì)胞（HRBC)或羊紅細(xì)胞（SRBC)反復(fù)免疫，都沒(méi)有能促進(jìn)T細(xì)胞功能的恢復(fù)，再用三硝基苯基-HRBC或三硝基苯基-SRBC加強(qiáng)免疫，也沒(méi)有產(chǎn)生抗三硝基抗體。北京藥品檢定所采用狂犬活疫苗免疫加以驗(yàn)證，也證實(shí)無(wú)論是血清抗體的產(chǎn)生或抗體本身的保護(hù)能力，裸鼠和有胸腺的小鼠是完全不同的。注射狂犬活疫苗的有胸腺普通小鼠可產(chǎn)生良好的免疫力，而對(duì)無(wú)胸腺裸鼠則不能產(chǎn)生可測(cè)出的免疫學(xué)反應(yīng)。

三、裸鼠在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用

近年來(lái)，無(wú)胸腺裸鼠作為一種新的動(dòng)物模型，活躍于免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、毒理學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域的研究工作中，尤其在免疫生物學(xué)、免疫病理學(xué)、移植免疫、腫瘤免疫、病毒和細(xì)菌免疫將等領(lǐng)域，在短短的數(shù)年中，就展開(kāi)了一系列富有成效的新的研究，推動(dòng)了各方面的工作，為實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)、實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)多供了新的有效的工具。

解剖裸鼠進(jìn)行組織學(xué)檢查，證實(shí)裸鼠無(wú)正常胸腺，僅有胸腺殘跡或異常的胸腺上皮，這種胸腺上皮不能使T細(xì)胞正常分化。淋巴結(jié)及脾臟胸腺依賴區(qū)淋巴細(xì)胞數(shù)目很少，所以裸鼠都是淋巴細(xì)胞減少癥的動(dòng)物，皮膚毛干萎縮，毛囊角化。

裸鼠T淋巴細(xì)胞缺損，表現(xiàn)為脾細(xì)胞失去細(xì)胞表面的θ抗原和喪失對(duì)有絲分裂刺激物反應(yīng)的能力。θ抗原是某些淋巴樣細(xì)胞在其T細(xì)胞活化前的一種分化抗原。由于裸鼠沒(méi)有T細(xì)胞，不能執(zhí)行正常T細(xì)胞的功能，它們?cè)诨旌狭馨图?xì)胞反應(yīng)中沒(méi)有有絲分裂反應(yīng)，也不產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)細(xì)胞，對(duì)刀豆素A或植物凝集素P亦無(wú)促分裂原應(yīng)答，無(wú)接觸敏感性，無(wú)移植排斥，無(wú)移植抗宿主反應(yīng)及無(wú)輔助T細(xì)胞或抑制T細(xì)胞的生成。無(wú)輔助和抑制T細(xì)胞的裸鼠，可明顯地改變它對(duì)原抗體的反應(yīng)。

（一)組織移植（人類腫瘤移植)研究

由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情況下，不排斥來(lái)自異種動(dòng)物的組織移植。因此可作移植人類惡性腫瘤的接受體。根據(jù)T.Fogh等1979～1980年的報(bào)導(dǎo)，已有150株人的瘤細(xì)胞和人體原發(fā)癌移植于裸鼠獲得成功，目前已成功地結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、腎癌、宮頸癌、軟組織肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、獲得了一定百分比（35.7%)的良好生長(zhǎng)，并可傳代（見(jiàn)表4-1)。若用已建株的人體腫瘤組織培養(yǎng)細(xì)胞作移植材料，接種后的成活率更高（41%)。我國(guó)北京醫(yī)科大學(xué)等5人醫(yī)院，使用北京藥品檢定所繁殖的裸鼠對(duì)人體結(jié)腸癌、直腸癌、食道癌、乳腺癌、宮頸癌、咽癌、骨巨噬細(xì)胞癌的移植均獲得了成功。

表4－1　在裸鼠移植成功的人類惡性腫瘤

人體腫瘤移植于免疫缺陷動(dòng)物，能保持其生物學(xué)特性，用于研究人體腫瘤對(duì)藥物的敏感性有很大幫助。早期工作是將人體腫瘤移植于動(dòng)物缺乏免疫機(jī)能的特殊部位，如雞胚、動(dòng)物的眼前房，倉(cāng)鼠頰囊內(nèi)等，雖有一定比例的成活率，但因腫瘤生長(zhǎng)緩慢又受移入部位包膜的限制，腫塊往往較小，難于傳代，更不能適應(yīng)需要較多瘤源的實(shí)驗(yàn)治療工作。

腫瘤已成為當(dāng)前威脅人類最嚴(yán)重的常見(jiàn)病之一，每年死于此病的人數(shù)以百萬(wàn)計(jì)，因此，建立模型，進(jìn)行防治研究，是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中的重要課題。我國(guó)在這方面已開(kāi)始做了不少探索，已建立了18種裸鼠移植瘤（見(jiàn)表4-2)。從研究范圍來(lái)看，有以下六個(gè)方面。

表4－2　人類腫瘤裸鼠移植的建立

1．人癌細(xì)胞株致癌性的檢測(cè)及其裸鼠移植瘤的建立。

2．人癌裸鼠移植瘤的建立及其生物特性的研究。

3．人癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移調(diào)控機(jī)理的研究。

4．乙型肝炎病毒基因工程疫苗研究中高效表達(dá)HBsAg細(xì)胞系致癌性檢定。

5．人癌實(shí)驗(yàn)性治療的研究。

6．腫瘤病因?qū)W的研究一化學(xué)致癌物質(zhì)致癌性的研究。

在這些研究所項(xiàng)目中，除人鼻咽癌裸鼠移植癌的建立未獲成功外，其余各項(xiàng)均獲得成功。如北醫(yī)的人腸粘膜腺瘤裸鼠移植瘤，裸鼠間的移植傳代成活率為100%，具有人類原發(fā)瘤特性。并獲得了肺癌高轉(zhuǎn)移率的裸鼠移植瘤。又如乳腺髓樣瘤等細(xì)胞系致癌性檢定和裸鼠移植癌的建立，其成功率為83.8～100%，超過(guò)了國(guó)際上60%的報(bào)導(dǎo)。

移植于裸鼠的人類惡性腫瘤具有以下特征：

1．被移植腫瘤仍保持原有組織學(xué)構(gòu)造或各種機(jī)能。

2．將人癌組織的組織培養(yǎng)物移種于裸鼠時(shí)，能重現(xiàn)已在組織培養(yǎng)中消失的原有的癌結(jié)構(gòu)。

3．幾乎未發(fā)現(xiàn)被移植腫瘤的轉(zhuǎn)移。

上述特征有助于分析人類腫瘤的性質(zhì)。

1．裸鼠體內(nèi)免疫缺陷機(jī)制恒定，其它鼠類需另加去免疫措施，其條件恒定性受個(gè)體差異因素影響。

2．可以控制腫瘤的致癌性，使人體腫瘤移植后良好生長(zhǎng)。

3．接種成功的瘤結(jié)構(gòu)具有原腫瘤的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，有利于體外培養(yǎng)的瘤細(xì)胞株的鑒定；

4．研究腫瘤在體內(nèi)的生長(zhǎng)行為與過(guò)程，探討腫瘤與宿主免疫間的相互關(guān)系。

5．體內(nèi)和體外研究互補(bǔ)配合進(jìn)行觀察。

6．可利用其建立穩(wěn)定的動(dòng)物模型，進(jìn)行藥物篩選。腫瘤細(xì)胞形態(tài)、染色體含量和同功酶水平與人體腫瘤一樣，說(shuō)明未發(fā)生細(xì)胞選擇和細(xì)胞雜交現(xiàn)象，細(xì)胞動(dòng)力學(xué)和生物化學(xué)特征也未改變。

7．在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行連續(xù)接種傳代后的腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)中也易于獲得長(zhǎng)期生存，可提高培養(yǎng)的成功率等。

因此，裸鼠的應(yīng)用，將對(duì)腫瘤基礎(chǔ)研究工作做出新的貢獻(xiàn)。

（二)腫瘤藥物治療和腫瘤免疫研究

裸鼠接種成活的腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性與臨床所見(jiàn)十分相近。黑色素瘤以DTIC和CCNU的抑瘤作用較強(qiáng)，而5-Fu則無(wú)效，與其臨床客觀療效（三藥分別為20%、12%及2.5%)結(jié)果相似。人的Burkitt淋巴瘤的裸鼠移植后對(duì)環(huán)磷酰胺有較高的敏感性，也與臨床結(jié)果相符。其它腫瘤如乳腺癌和結(jié)腸癌裸鼠移植，對(duì)前者阿霉素（5mg/kg)、5-Fu(50～80mg/kg)和苯丙氨酸氮芥（7mg/kg)均有一定的抑瘤效能，對(duì)后者甲基一CCNO和絲裂毒素也明顯療效。有趣的是對(duì)P333無(wú)效的六甲密胺，卻對(duì)人體肺癌異種移植有效，應(yīng)用其耐受劑量60～90mg/kg都有消瘤作用，對(duì)人體乳瘤MX-1和結(jié)腸瘤CX-1也有效。此藥重新臨床試用，證明對(duì)人支氣管肺癌和淋巴瘤都有治療作用。最近，對(duì)過(guò)去因毒性較大而中斷研究的偶氮氧代正亮氨酸，重新用人腫瘤裸鼠模型評(píng)價(jià)，證明對(duì)MX-1和肺癌LX-1有明顯療效，又重新進(jìn)入臨床研究。近有人用胸腺嘧啶核苷等444～888mg/kg給腫瘤裸鼠連續(xù)灌注96～140小時(shí)，發(fā)現(xiàn)它能明顯抑制人體黑色素瘤及畸胎瘤的生長(zhǎng)，并導(dǎo)致腫瘤消退而對(duì)宿主無(wú)明顯毒性，這些新結(jié)果已引起了臨床重視。

近年來(lái)將人癌組織移植入裸鼠腎囊膜內(nèi)，觀察腫瘤生長(zhǎng)大小，在雙目顯微鏡下測(cè)量腫瘤直徑OMU，比較給藥組和對(duì)照組的差異，在11天左右可以得到評(píng)價(jià)藥物療效的結(jié)果。

在腫瘤免疫研究方面，F(xiàn)rance報(bào)導(dǎo)無(wú)胸腺裸鼠用4（5)-33-二甲基-1三唑-5（4)碳胺[Dic4(5)-33-dimethyl-1-triazlon　inidazole-5(4)Carboxamide]　處理后，明顯增強(qiáng)了對(duì)L1210和L3TRA淋巴瘤株的免疫原性。

（三)免疫和遺傳研究

由于近代遺傳學(xué)的迅速發(fā)展，已發(fā)現(xiàn)40余種免疫缺陷病與遺傳因素有關(guān)。許多報(bào)導(dǎo)只介紹了這些疾病的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，有關(guān)發(fā)病機(jī)理則停留在假說(shuō)階段，這主要是由于沒(méi)有與人類所患的免疫缺陷性疾病相對(duì)應(yīng)的自發(fā)性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，無(wú)法通過(guò)患病動(dòng)物來(lái)觀察疾病發(fā)生與發(fā)展的全過(guò)程，從而無(wú)法闡明其遺傳規(guī)律。

先天性無(wú)胸腺裸鼠的遺傳因素，免疫動(dòng)物原缺陷指標(biāo)以及剖檢所見(jiàn)和組織學(xué)觀察等特征，均與人類免疫缺陷性疾病中的原發(fā)性細(xì)胞免疫病相似。各品系裸鼠因遺傳背景的不同，所表現(xiàn)的細(xì)胞免疫反應(yīng)和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)亦各不相同。這些裸鼠種群是研究人類各種免疫缺陷性疾病的發(fā)病機(jī)理和遺傳規(guī)律的動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)家已育成具有不同免疫缺陷特性的近交系小鼠達(dá)50余種。我國(guó)所應(yīng)用的自發(fā)性免疫缺陷小鼠，主要應(yīng)用的是BALB/C遺傳背景的裸鼠，個(gè)別實(shí)驗(yàn)室也應(yīng)用了NIH、ICR等非近交系裸鼠。

（四)病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)感染機(jī)制的研究

無(wú)胸腺裸鼠的T淋巴細(xì)胞缺損，免疫機(jī)能低下，是研究病毒、細(xì)菌及寄生蟲(chóng)感染機(jī)制的極好模型動(dòng)物。如可用于研究乙型腦炎SA14－14－ZHK7減毒株為乙腦活毒疫苗的選育株，在正常小鼠體內(nèi)可產(chǎn)生符合規(guī)定的免疫原性（LD50)，而在胸腺缺少或胸腺發(fā)育不良的生物個(gè)體免疫原性如何，對(duì)于今后現(xiàn)使用具有參考價(jià)值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)表4-3，以BALB/Ｃ（+/+)小鼠為對(duì)照。

表4－3　乙腦弱毒株免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以上結(jié)果說(shuō)明，乙腦病毒感染后所產(chǎn)生的免疫力，主要屬于細(xì)胞免疫，如使T細(xì)胞缺陷的裸鼠體內(nèi)產(chǎn)生與免疫功能正常小鼠同等水平的免疫力，必須加大40倍的免疫劑量，才能達(dá)到。也說(shuō)明裸鼠體內(nèi)還存在著殘余的T淋巴細(xì)胞。由此推論，在現(xiàn)場(chǎng)人群中產(chǎn)生抗體水平較低者，其T細(xì)胞功能是否缺陷，應(yīng)作為因素之一加以探討。

裸鼠已被證明是研究T淋巴細(xì)胞功能缺損下，分枝桿菌感染的最好模型，其腫瘤的自發(fā)率極低。

（五)生物制品和藥品的檢定

生物制品（疫苗、菌苗)的安全性的免疫原性是制品必不可少的內(nèi)容之一。它涉及制品是否有潛在制癌性、感染因子以及它的毒力是否有返祖的可能性。特別是在應(yīng)用動(dòng)物組織培養(yǎng)疫苗或人類二倍體細(xì)胞株時(shí)，對(duì)檢出這些細(xì)胞潛在的致癌性、某些制品引起的異常發(fā)應(yīng)及其發(fā)生機(jī)理、對(duì)藥物致癌性或抗癌藥物的研究等諸方面，先天性胸腺機(jī)能缺陷的裸鼠是很好的動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)手段。

（六)　微生物學(xué)上的研究

以往人類麻風(fēng)桿菌只有背上夠九條紋的犰狳（Armadillo)身上才能生長(zhǎng)，而這種產(chǎn)于南美等地的動(dòng)物難于尋找，也不易飼料和操作。1975年Colston等將麻風(fēng)桿菌接種于裸鼠足掌，發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)桿菌可大量繁殖，全身擴(kuò)散，引起瘤型麻風(fēng)。這為研究麻風(fēng)桿菌的生物特性、免疫原性和麻風(fēng)病發(fā)病機(jī)理提供了極為有用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p>

又如淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)膜腦膜炎（LCM)病毒經(jīng)腦內(nèi)接種于無(wú)本病毒隱性感染的正常小鼠，可引起腦膜炎，感染細(xì)胞被當(dāng)作靶細(xì)胞而受到破壞，在腦、脊髓內(nèi)發(fā)生了明顯的細(xì)胞免疫反應(yīng)，但在T細(xì)胞缺損的裸鼠所見(jiàn)卻完全相反，未導(dǎo)致動(dòng)物的死亡，僅出現(xiàn)持續(xù)病毒血癥，體內(nèi)不出現(xiàn)LCM抗體，也無(wú)任何免疫反應(yīng)。

（七)內(nèi)分泌和老年醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用

在人工摘除胸腺動(dòng)物，大多數(shù)研究可見(jiàn)腦下垂體、甲狀腺、腎上腺、性腺等出現(xiàn)異常。有人用無(wú)特定病原體環(huán)境中的飼料的裸鼠和正常小鼠進(jìn)行研究，分析3、9、11周齡的雌雄動(dòng)物的腦下垂體生長(zhǎng)激素及甲狀腺、腎上腺皮質(zhì)和性腺的功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者間未見(jiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差別。

在老年醫(yī)學(xué)的研究上，有人認(rèn)為裸鼠沒(méi)有T細(xì)胞，容易引起自身免疫現(xiàn)象，皮膚的可溶性膠原（Collaggen)也減少，因此認(rèn)為胸腺、自身免疫、老化三者之間是有關(guān)系的。但這方面也有不同論點(diǎn)。

（八)目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用裸鼠開(kāi)展的研究課題簡(jiǎn)況

1．T和NK細(xì)胞免疫功能缺陷型——Beige裸鼠育成及其基本特征的研究。

2．非近交系615/PBI-beige/nude小鼠免疫功能的初步研究。

3．T和NK細(xì)胞聯(lián)合缺陷型小鼠體內(nèi)人類腫瘤移植瘤的轉(zhuǎn)移研究。

4．免疫缺陷型動(dòng)物（裸鼠)體內(nèi)人類腫瘤癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的研究。

5．裸小鼠腹腔內(nèi)篩選高轉(zhuǎn)移性人肺腺癌細(xì)胞及其生物學(xué)特性的研究。

6．Urethane誘發(fā)BALB/c裸小鼠肺腺癌及其在裸小鼠皮下生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的特性。

7．五種人癌細(xì)胞株裸小鼠移植轉(zhuǎn)移特性的初步研究。

8．裸鼠人體惡性黑色素瘤模型的建立和病理觀察。

9．三株人肺癌裸小鼠移植模型長(zhǎng)期傳代的形態(tài)觀察。

10．裸小鼠可移植性人肺癌瘤株的建立及其生長(zhǎng)特性和微細(xì)的結(jié)構(gòu)的觀察。

11．裸鼠體內(nèi)傳代及體外培養(yǎng)的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系的建立。

12．人肺巨細(xì)胞癌PLA-801群體細(xì)胞及其克隆化細(xì)胞株（A、C、D、E)裸鼠皮下種植后自發(fā)轉(zhuǎn)移特性的研究。

13．人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系裸小鼠實(shí)體瘤模型NHG-1的建立及其特征的研究。

14．人腦室管膜瘤轉(zhuǎn)移植于裸小鼠的實(shí)驗(yàn)研究。

15．兩株裸大鼠人肝癌模型的建立和生物學(xué)特性的觀察。

16．人胃癌裸鼠移植模型的建立及其生物學(xué)特性的初探。

17．人胃腺癌裸鼠動(dòng)物模型的建立。

18．615裸鼠體內(nèi)建立的人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株。

19．人直腸粘液腺瘤裸鼠移植瘤株的建立及傳代的初步小結(jié)。

20．裸鼠人體原發(fā)性肝癌生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)的一些特點(diǎn)及其甲胎球蛋白分泌的研究。

21．流式細(xì)胞儀（Flow　Cytometer)在裸鼠人體鼻咽癌生物學(xué)特性研究中的應(yīng)用。

22．外放射順鉑及混合細(xì)菌疫苗多模型綜合治療對(duì)裸鼠人肝癌的實(shí)驗(yàn)研究。

23．裸鼠人肝癌模型在肝癌導(dǎo)向研究中的應(yīng)用。

24．抗膠質(zhì)瘤的McAb在人腦膠質(zhì)癌裸小鼠模型NHG-1中的導(dǎo)向研究。

25．核素導(dǎo)向內(nèi)放射合并高溫對(duì)裸鼠人肝癌的治療作用。

26．影響裸小鼠B淋巴細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化因素的初步探討。

27．裸小鼠諸器官及血清雙向電泳“蛋白圖”。

28．裸小鼠血漿氨基酸測(cè)定。

29．三種人腦瘤裸小鼠模型的染色體初步分析。

30．應(yīng)用裸鼠凈化支原體污染細(xì)胞的初步觀察。

31．裸鼠肝炎病理觀察及分析。

32．裸鼠人體原發(fā)性肝癌實(shí)驗(yàn)資料的計(jì)算機(jī)處理。

33．小型SPF裸鼠實(shí)驗(yàn)室的建立及其在臨床腫瘤實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

34．用人肺腺癌移植瘤進(jìn)行快速藥敏試驗(yàn)。

35．人癌裸鼠移植瘤宿主血清中唾液酸及唾液酸糖蛋白含量變化的研究。

36．平陽(yáng)毒素和博來(lái)霉素A6對(duì)裸鼠移植的人體肝癌和胃癌的抑制作用。

37．人低分化鼻咽癌上皮細(xì)胞株裸小鼠移植模型的研究。

38．裸鼠飼料滅菌方法探討。

39．裸小鼠繁育與質(zhì)量控制的初步報(bào)告。

40．SPF小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室的建立及繁殖應(yīng)用研究。

41．裸鼠室的建立及裸鼠的繁育。

42．NC裸小鼠的繁育與人腦瘤移植。

43．免疫抑制小鼠模型的建立及人類大腸癌細(xì)胞株HRT-18的異種移植研究。

44．人類腫瘤細(xì)胞系裸小鼠體內(nèi)移植的綜合研究。

45．人癌移植于裸小鼠的實(shí)驗(yàn)研究。

46．無(wú)胸腺裸小鼠的皮膚病研究中的應(yīng)用。

四、裸鼠的繁殖和飼料條件

（一)繁殖

目前繁殖裸鼠不用nu/nu雌鼠，因其繁殖性能低，一般采用雜合子交配方式或隱性純合子雄性與雜合子雌鼠交配。這種交配方法，其后代將出現(xiàn)表現(xiàn)型正常的仔鼠和裸鼠，比例為1：1。

繁殖時(shí)一般將nu基因?qū)�入C57BL/10小鼠中。在把基因?qū)�入同源（Cogenic)品系時(shí)，一般用雌性C57BL/10與雄性C57BL/10-nu（遠(yuǎn)交株)雜交。其交配方法和結(jié)果如下：

北京藥品檢定所繁殖裸鼠用的鼠種是BALB/C-nu/nu，系1973年從丹麥引入日本中央實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所研究。繼續(xù)培育三年后，交由日本CLEA株式會(huì)社進(jìn)行生產(chǎn)。1980年由CLEA引入。雄鼠是無(wú)胸腺裸鼠（BALB/C-nu/nu)，雌鼠是有胸腺的雜合小鼠（BALB/C-nu/+)。采用BALB/C-nu/+♀與BALB/C-nu/nu♂隨機(jī)交配法進(jìn)行繁殖，已取得較好成果，裸鼠的生產(chǎn)性能良好：受胎率達(dá)81.5%，平均產(chǎn)仔率8.1只/窩，平均產(chǎn)裸仔率3.99只/窩，窩平均仔鼠成活3.62只，9周齡仔鼠成活率100%，其主要項(xiàng)目數(shù)據(jù)與日本中央實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所（CLEA)和英國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（LAC)發(fā)表的材料基本一致。

（二)飼料條件

因?yàn)槁闶笕狈�T細(xì)胞，易受細(xì)菌、病毒和霉菌感染的損害，如按常規(guī)動(dòng)物方式飼養(yǎng)，只有少數(shù)裸鼠能生存一個(gè)月以上，最多不超過(guò)四個(gè)月，而放在隔離器（Isolator)中飼料的可存活一年以上。因此，裸鼠的壽命與飼料的衛(wèi)生條件有密切的關(guān)系。一般是先在隔離器中繁殖。然后放入無(wú)特定病原體屏障環(huán)境中飼料。

無(wú)病原體條件的飼料需要在動(dòng)物和外界之間裝置一個(gè)屏障，屏障越嚴(yán)，飼料健康裸鼠就越有保證，然而，如不注意選擇屏障的類型，它的效果就沒(méi)有保證，故應(yīng)持續(xù)檢查是否符合條件。

1．無(wú)病原條件飼料裸鼠設(shè)備

⑴帶有密封空氣過(guò)濾裝置的塑料籠。每一籠自為一個(gè)單元。它包括一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的透明塑料籠，籠蓋上覆有空氣過(guò)濾材料。后者與籠子的貼近處用膠帶纏繞數(shù)周予以密封。然后，此籠可置于一般實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)籠架上。過(guò)濾材料呈片狀，由疏紡的（但非紡織的)聚酯纖維制成。它應(yīng)該能夠防止微生物從籠外進(jìn)入籠內(nèi)。

全套籠具皆經(jīng)高壓蒸汽滅菌。使用它和喂養(yǎng)管理（如加飲水和飼料、清籠、斷奶等)時(shí)，都必須在一個(gè)防護(hù)罩內(nèi)進(jìn)行。罩內(nèi)所含有的是正壓過(guò)濾空氣。而且還是層流（無(wú)湍流的)、單向的。

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為了最有效的控制環(huán)境，從而得以盡力保存無(wú)菌的（或帶有一定菌群)裸體小鼠，隔離器是理想的存養(yǎng)設(shè)備。但它也有缺點(diǎn)，這就是費(fèi)勞力，在一定空間中繁育動(dòng)物的數(shù)量有限。

⑶空氣層流器。它包括標(biāo)準(zhǔn)的小室，覆罩和網(wǎng)架。每套器具形成一個(gè)獨(dú)立的環(huán)境，與室內(nèi)通風(fēng)系統(tǒng)無(wú)關(guān)。它自己輸入過(guò)濾空氣，把超凈空氣完滿地注入鼠籠，并以柱狀排出。由于每套器具互不相干，又有正壓空氣防護(hù)，所以可把它們放在通常條件下。它們是手提式的，既便于維修，又能最大限度地利用房舍和設(shè)備。

使用此種方法是否成功，取決于管理工作的好壞。密切監(jiān)視房室的污染和人員流動(dòng)，只準(zhǔn)專職人員入室。應(yīng)當(dāng)在正壓、單向氣流條件下料理維修鼠籠，接觸小鼠的一切物品（飼料和其它物品)都必須滅菌。飲水須經(jīng)處理除去細(xì)菌，專職工作者須穿戴無(wú)菌的外科口罩、帽子、手套和后長(zhǎng)衣，觸及動(dòng)物時(shí)須用頭端包有橡皮的鑷子，而且必須經(jīng)變性乙醇（就放在一邊)的浸洗。

⑷空氣層流室。有別于上述的一個(gè)房間內(nèi)放置的小型空氣層流器，而是整個(gè)房間的環(huán)境都為正壓過(guò)濾空氣所籠罩。設(shè)計(jì)時(shí)，須裝置空氣進(jìn)入的開(kāi)關(guān)，空氣入口要裝指示器。工作人員在室內(nèi)的穿戴同上所述。室內(nèi)應(yīng)用的飼料、墊料和籠具的滅菌，須用兩端有開(kāi)關(guān)的高壓蒸氣滅菌器。

引種方法可最大限度地利用房舍以繁育動(dòng)物。雖然裝設(shè)此種房間

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掌�謱�(xiě)笥?.3μm的顆粒�？諝獬隹谝灿羞^(guò)濾裝置（也可以用效能上較低的)以防止空氣倒流時(shí)的污染，而且要先設(shè)計(jì)好怎樣從室外維修這些過(guò)濾器。

在空氣層流室內(nèi)，空氣的正壓至少為0.65cmH2O�？諝獾牧飨蚝退俣纫�控制得均勻而自由。過(guò)濾的空氣連續(xù)掠過(guò)鼠籠時(shí)，奔流于動(dòng)物環(huán)境之中，在理論是一個(gè)防止外源性污染的屏障。

⑷光照。每日應(yīng)當(dāng)維持10小時(shí)光照，14小時(shí)無(wú)光的明暗周期。不用窗戶，用人工照明，使全年光照恒定，但應(yīng)避免過(guò)強(qiáng)的熒光燈光照。

3．籠具和墊料

培育裸體小鼠的籠具，籠底面積應(yīng)當(dāng)為97平方厘米（15平方吋)，高度應(yīng)為12.7厘米（5吋)，應(yīng)選可耐受高壓蒸氣滅菌的塑料或不銹鋼制作。其造型應(yīng)當(dāng)便于重疊，以利滅菌和存貯。透明塑料籠較好，用時(shí)不必打開(kāi)籠蓋就要觀察動(dòng)物�；\底要放墊料，不能用網(wǎng)。

籠子必須每周清潔一次，或視需要處理，以保證環(huán)境清潔、干燥。用去污劑或其它洗滌劑清洗后的籠子或其它物品，必須充分沖洗干凈。否則，會(huì)刺激裸體小鼠的皮膚。

墊料直接接觸裸體小鼠的皮膚，不能帶有刺激性。可選用不帶塵土和尖塊的硬木屑，研磨過(guò)的玉米桿，或用松木刨花。用前都要滅菌，且滅菌后不結(jié)成塊狀才可使用。

為裸體小鼠建巢可用棉花或棉紙。但是，如果墊料有一

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力不得超過(guò)10磅。維生素混合液及水應(yīng)適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行某些細(xì)菌培養(yǎng)的檢查，并應(yīng)隔天更換水瓶，水瓶和飲水管在兩次使用之間必須洗滌和消毒。

通過(guò)飲水供給抗菌素，可消除胃腸道的細(xì)菌（Van　Der　Waaij氏，1966)。并且，這也是一個(gè)防止裸體小鼠在嚴(yán)格的環(huán)境控制下可能發(fā)生的外源污染的附加措施。我們使用的四種配方如表4-4所示。下列抗菌素很少消化道吸收，每一種配方應(yīng)每周更換一次，每四周輪換一遍，可減少抗藥菌株的出現(xiàn)。

假如你一開(kāi)始就在嚴(yán)格控制的環(huán)境中繁育無(wú)菌裸體小鼠，則也可以不必使用抗菌素，因?yàn)榧佑每股�素后在繁育技術(shù)上出現(xiàn)差錯(cuò)的可能性也就增加了。

表4－4　裸體小鼠飲水中所用抗菌素的種類和用法

5．空氣層流室的保養(yǎng)

層流室內(nèi)從地面到天花板以及設(shè)備均需保持無(wú)塵和無(wú)破碎。每月必須檢測(cè)室內(nèi)的無(wú)菌情況，每平方米放一個(gè)平皿，檢查室內(nèi)空氣中的細(xì)菌數(shù)量。落下菌的檢查各國(guó)規(guī)定不同，見(jiàn)下表

表4－5　各國(guó)層流室落下菌限度的規(guī)定

除落下菌數(shù)目不得超過(guò)限度外，并且不能有致病菌存在，否則，需要重新消毒。

一切可移動(dòng)的設(shè)備最好高壓滅菌，不可移動(dòng)的裝置（如墻、地板、天花板等)要用液體酚類消毒劑徹底清潔，消毒應(yīng)重復(fù)進(jìn)行三次。消毒后房間應(yīng)密封，48小時(shí)后作微生物學(xué)污染檢測(cè)，如檢測(cè)是陰性，才允許使用。工作人員入內(nèi)必須穿戴全套滅菌外科手術(shù)衣和消毒的長(zhǎng)靴。

（三)裸鼠生產(chǎn)

為了保證裸鼠具有相應(yīng)品系的遺傳純度和嚴(yán)格的微生物控制要求，應(yīng)根據(jù)裸鼠所具有特殊性，建立以下生產(chǎn)制度進(jìn)行生產(chǎn)（見(jiàn)圖4-1)。

圖4-1　裸鼠生產(chǎn)制度

1．核心群的動(dòng)物（GF)：按微生物學(xué)要求，應(yīng)是經(jīng)過(guò)無(wú)菌剖腹手術(shù)飼料在小型隔離器內(nèi)的無(wú)菌動(dòng)物。按遺傳學(xué)要求，一個(gè)隔離器內(nèi)的動(dòng)物應(yīng)是相應(yīng)的近交系，采用兄妹交配，一個(gè)隔離器是帶有nu純合基因的，采用回交和互交方法進(jìn)行維持。

2．?dāng)U大群動(dòng)物（GB)：按微生物學(xué)要求，應(yīng)是來(lái)自核心群的無(wú)菌的幼小裸鼠和雜合鼠，放入大隔離器內(nèi)或水平層流的小隔離房?jī)?nèi)，并對(duì)這些幼鼠導(dǎo)入復(fù)合的正常腸內(nèi)菌叢，使之變成悉生動(dòng)物。按遺傳學(xué)要求，應(yīng)保持nu等位基因的純合子和雜合子進(jìn)行生產(chǎn)。

3．生產(chǎn)群動(dòng)物的種子群，應(yīng)來(lái)自擴(kuò)大群的動(dòng)物，飼料在屏障系統(tǒng)內(nèi)，一個(gè)生產(chǎn)周期為6～20個(gè)月。

試驗(yàn)期裸鼠也應(yīng)以裸鼠的免疫功能缺陷特性，按以下體系進(jìn)行試驗(yàn)與飼料（見(jiàn)圖4-2)。

⑴裸鼠移植癌建立和檢疫。

⑵腫瘤維持。

⑶大量移植。

圖4-2　維持腫瘤預(yù)防感染體系

總之，應(yīng)按生產(chǎn)裸鼠所有的要求進(jìn)行，否則試驗(yàn)不易獲得成功。

飼料繁殖裸鼠必須注意的問(wèn)題：

⑴建立屏障系統(tǒng)是飼料繁殖裸鼠的重要條件。裸鼠先天性胸腺缺失，免疫系統(tǒng)不健全，缺乏對(duì)付外來(lái)因子的抵抗力，對(duì)病原體極易感染，在常規(guī)環(huán)境中，最多只能生存數(shù)月，因此，必須要在無(wú)病原隔離飼料環(huán)境中飼料。根據(jù)我國(guó)目前實(shí)際情況，尚不能新建更多的高標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施，而改造現(xiàn)有建筑的辦法是可行的。改建后的屏障飼養(yǎng)室雖與科技發(fā)達(dá)國(guó)家相比是比較簡(jiǎn)陋的，但基本上達(dá)到了屏障系統(tǒng)設(shè)施的要求，費(fèi)用大為降低，也可使裸鼠繁殖工作正常進(jìn)行。

⑵裸鼠繁殖方法最好選用純合子隱性（nu/nu)雄鼠與雜合子（nu/+)雌鼠進(jìn)行交配生產(chǎn)。因?yàn)榧兒献与[性雄鼠一般能正常生育，其仔代裸鼠和正常仔鼠的比例為1：1；所有正常的仔鼠都是雜合子，當(dāng)用這些小鼠作實(shí)驗(yàn)對(duì)照時(shí)，就可明顯地觀察到純合子與雜合子之間的不同差異。裸鼠繁殖的其它二種方法，均存在一定缺點(diǎn)，如采用雜合子（nu/+)雌雄鼠交配時(shí)，其子代中裸鼠與表現(xiàn)型正常的仔鼠的比例為1：3，所繁殖的裸鼠少，而且繁殖的正常小鼠可能是nu/+或+/+兩種基因的小鼠，除非通過(guò)育種，否則不易區(qū)別。又如采用純合子隱性（nu/nu)雄鼠和雌鼠交配繁殖，雖然所有的子代都是裸鼠，但這種繁育方法不很有效，因?yàn)榇坡闶蠓敝沉Φ停�同時(shí)護(hù)理也很困難。

⑶仔鼠出生后存活與否，關(guān)鍵在于哺乳，如不注意哺乳則哺乳期裸鼠死亡率很高。主要原因在于同窩哺乳的有雜毛純合仔鼠發(fā)育快，體大健壯，競(jìng)爭(zhēng)力強(qiáng)，與純合裸鼠爭(zhēng)食母乳而影響純合裸鼠的發(fā)育，以致其消瘦死亡。為了提高裸鼠生長(zhǎng)發(fā)育速度及存活率，采用純合裸鼠，雜合仔鼠分別哺乳，并對(duì)雌鼠加喂高蛋白、高維生素飼料。

⑷為了保持較長(zhǎng)期的正常繁殖生長(zhǎng)，就必須建立微生物監(jiān)測(cè)方法來(lái)控制質(zhì)量。因裸鼠免疫機(jī)能的缺陷，易受微生物、病毒和寄生蟲(chóng)感染，特別是易受小鼠肝炎病毒的感染，一但裸鼠感染上小鼠肝炎，同窩裸鼠會(huì)于生后36～134天相繼死亡，無(wú)一幸免。病鼠肝發(fā)生大理石樣變化，質(zhì)較硬，呈黃色、粗造、結(jié)節(jié)樣、邊緣不齊。對(duì)裸鼠的飼料繁殖威脅很大。在裸鼠的飼料中，常易發(fā)生所謂“消耗性綜合征”（Wasting　syndrome)實(shí)與裸鼠常見(jiàn)病之一的鼠病毒性肝炎感染有密切關(guān)系，用剖腹產(chǎn)可避免此病毒感染。

采用微生物的檢查方法時(shí)，要考慮裸鼠的生理特性，裸鼠屬于免疫機(jī)能缺陷的動(dòng)物，鼠肝炎病毒、仙臺(tái)病毒等感染后，血清中不產(chǎn)生抗體。因此，只能檢查同胎雜合仔鼠血清中的抗體情況，或直接分離病原體，或?qū)⒙闶蟮母谓M織接種于雜合仔鼠后，再用血清學(xué)方法測(cè)定其相應(yīng)抗體。因此，對(duì)裸鼠一些致病性的病毒和臺(tái)澤氏病原體等的檢查方法，主要是檢查同胎雜合鼠血清中抗體的產(chǎn)生情況，來(lái)判斷裸鼠是否被這些病原體所感染。

五、裸小鼠的常用品系及國(guó)同內(nèi)飼育應(yīng)用簡(jiǎn)況

裸鼠的常用品系及國(guó)內(nèi)有有關(guān)單位引進(jìn)飼育和在生物醫(yī)學(xué)各項(xiàng)研究中的應(yīng)用情況見(jiàn)表4-6。

表4－6　免疫缺陷動(dòng)物飼育及應(yīng)用調(diào)查表

615/PBI-beige/nude裸小鼠特征及應(yīng)用：

非近交系615/PBI-beige/nude小鼠（以下簡(jiǎn)稱為615-bg/nu)是一種T和NK細(xì)胞功能聯(lián)合缺陷型動(dòng)物，其主要遺傳背景來(lái)源于國(guó)內(nèi)培育的近交系小鼠615/GI/PBI。它是以615/PBI-nu和615·B6-bg為親本動(dòng)物。采用雜交一內(nèi)交和回交一內(nèi)交等五個(gè)不同交配步驟培育而成。經(jīng)北京腫瘤研究所免疫室初步研究表明，615-bg/nu的脾細(xì)胞NK活性（9.2±2.4%)雖略高于615·B6-bg(3.8±1.0%)，但顯著低于615/PBI-nu(39.3±4.8%)和BALB/C-nu(31.7±4.6%)，P值均小于0.01。在對(duì)ConA的反應(yīng)能力方面，615-bg/nu與非beige裸鼠相近（P>0.05)，而顯著低于615/PBI和615·B6-bg（P值小于0.01)。此外，不論是beige小鼠還是非beige小鼠，其脾細(xì)胞的NK活性都有隨其所含nu基因數(shù)目的增加而增加的趨勢(shì)。隨著nu基因的逐個(gè)增加，非beige小鼠的NK活性漸次由17.2%(+/+)、28.9%(+/nu)而至39.3%(nu/nu)，beige小鼠的NK活性則則3.8(+/+),7.7%(+/nu)最后至9.2%(nu/nu)。這表明nu基因不僅在純合狀態(tài)，而且在雜合狀態(tài)下也有增強(qiáng)NK活性的作用。

低NK活性的T細(xì)胞缺陷動(dòng)物模型-615-bg/nu的育成，為腫瘤免疫學(xué)和實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)的研究工作提供了一種極有價(jià)值的新實(shí)驗(yàn)材料。

六、裸大鼠的特性及應(yīng)用

裸大鼠是同英國(guó)阿伯丁Rowett研究所首先在1953年發(fā)現(xiàn)的，基因符號(hào)為rnu，。因難于飼養(yǎng)，僅維持至1960年代初。1975年再次發(fā)現(xiàn)純合子裸大鼠（rnu/run)。1977年2月在英國(guó)MRC實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心建立了裸大鼠種子群。1978年Festing首次詳細(xì)描述了裸大鼠，并報(bào)導(dǎo)了裸大鼠人癌異種移植。此后rnu裸大鼠分別引入歐洲及美日等國(guó)。1983年引入中國(guó)。1976年5月在新西蘭維多利亞大學(xué)發(fā)現(xiàn)了另一株裸大鼠，1979年由Mcneilage進(jìn)行了詳細(xì)報(bào)導(dǎo)。為了與rnu裸大鼠區(qū)別，其基因符號(hào)命名為nznu。因rnu裸大鼠的應(yīng)用范圍較廣，故絕大多數(shù)資料來(lái)自rnu裸大鼠。

利用先天無(wú)胸腺裸小鼠建立動(dòng)物人癌模型，是腫瘤模型研究的重大進(jìn)展。這些模型已廣泛用于各種研究。裸大鼠的發(fā)現(xiàn)及人癌異種移植的成功，給腫瘤和免疫工作者增添了一個(gè)新的手段。由于以裸大鼠代替裸小鼠，具有移植瘤大、取血量多、可行某些外科小手術(shù)等優(yōu)點(diǎn)，因此比裸小鼠有具一定的優(yōu)越性。

（一)裸大鼠的特點(diǎn)

1．免疫器官及血細(xì)胞特性：裸大鼠免疫器官的組織學(xué)，與裸小鼠極為近似。Vos等報(bào)告，在3周齡裸大鼠縱膈的連續(xù)切片中，只見(jiàn)胸腺殘?bào)w，內(nèi)m.quanxiangyun.cn/wszg/有未分化的上皮細(xì)胞及小囊種，而未見(jiàn)淋巴細(xì)胞。純合子裸大鼠（rnu/rnu)腸系膜及腘淋巴結(jié)相對(duì)小于雜合子（rnu/+)。淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)實(shí)際上淋巴細(xì)胞。脾的外形及重量上，雜合子與純合子并無(wú)區(qū)別，但依賴胸腺部位的小動(dòng)脈周?chē)�淋巴�?xì)胞。Berridge等報(bào)導(dǎo)，裸大鼠的白細(xì)胞總數(shù)在正常鼠范圍之內(nèi)，但分類計(jì)數(shù)卻有明顯不同。純合子（nznu/nznu)的中性白細(xì)胞較雜合子（nznu/+)高4倍，而雜合子的淋巴細(xì)胞較純合子高2.5倍。Vos報(bào)告，rnu裸大鼠血液淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)隨年齡而降低，而嗜中性、嗜酸性及單核細(xì)胞計(jì)數(shù)則明顯地增高。

2．免疫功能特性

⑴T細(xì)胞功能：先天性無(wú)胸腺，缺少T細(xì)胞，T細(xì)胞功能明顯有喪失。對(duì)皮膚移植，在雜合子對(duì)照組，同種皮膚移植約在10天后排斥，但在rnu裸大鼠，同種或異種皮膚移植生長(zhǎng)可達(dá)3～4個(gè)月以上。對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)，rnu裸大鼠對(duì)結(jié)核菌素?zé)o陽(yáng)性遲發(fā)型超敏反應(yīng)。用破傷風(fēng)類毒素和卵蛋白免疫，rnu裸大鼠血中未能測(cè)出IgM及IgG抗體；而在雜合子大鼠血中，可測(cè)出正常滴度的破傷風(fēng)毒素抗體。對(duì)T細(xì)胞有絲分裂原（植物血凝素、刀豆球蛋白和美洲商陸)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)。

⑵B細(xì)胞功能：一般說(shuō)B細(xì)胞功能是正常的。Brooks等用抗Ig及抗T細(xì)胞抗體對(duì)rnu/rnu及rnu/+大鼠脾和淋巴結(jié)細(xì)胞行免疫熒光染色檢查，發(fā)現(xiàn)在rnu裸大鼠，Ig+標(biāo)記的細(xì)胞及裸細(xì)胞比例增加，而大多數(shù)Ig+標(biāo)記細(xì)胞被認(rèn)為是B淋巴細(xì)胞。測(cè)定rnu裸大鼠與表現(xiàn)型正常大鼠（rnu/+或+/+)對(duì)大腸村菌LPS的IgM抗體滴度，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯差別。在體外用B細(xì)胞有絲分裂原金黃色葡萄球菌刺激rnu/rnu及rnu/+大鼠脾細(xì)胞，也未見(jiàn)攝取胸腺嘧啶能力的差別。

⑶NK細(xì)胞功能：NK細(xì)胞活力增強(qiáng)。De　Jong報(bào)告，裸大鼠NK細(xì)胞活力高于對(duì)照組。在腸系膜淋巴結(jié)，rnu裸大鼠NK活力比雜合子（rnu/+)高達(dá)10倍之多。Lotzovd將這方面的工作歸納如下：裸大鼠可測(cè)及NK細(xì)胞的活力；在腹腔滲液中，NK細(xì)胞的活力最高，周?chē)�血及脾臟內(nèi)較低，骨髓無(wú)NK細(xì)胞活力；裸大鼠NK細(xì)胞m.quanxiangyun.cn/shiti/活力高于胸腺大鼠；小于3周齡者未能測(cè)及NK細(xì)胞活力；用干擾素誘導(dǎo)劑ABPP可以提高NK細(xì)胞活力；介導(dǎo)細(xì)胞毒性的效應(yīng)細(xì)胞存留于富含LGL部分中；NK細(xì)胞活力的加強(qiáng)與干擾素的水平有關(guān)。

3．其它特征

⑴體毛稀少：裸大鼠并非象裸小鼠那樣完全無(wú)毛，而是體毛稀少，有時(shí)暫時(shí)完全消失，以后又復(fù)現(xiàn)。年齡較大的雄裸大鼠的尾根往往多毛。

⑵發(fā)育相對(duì)遲緩：與裸小鼠一樣，rnu裸大鼠發(fā)育相對(duì)緩慢。其體重僅相當(dāng)于正常大鼠的70%。

⑶雌性大鼠繁育能力低：與裸小鼠一樣，雌裸大鼠在妊娠期無(wú)乳腺發(fā)育，仔鼠因得不到母乳，生后很快死亡。故裸大鼠繁殖，仍用雄純合鼠（rnu/rnu)與雌雜合鼠（rnu/+)交配繁方法。新生仔鼠中純合體與雜合體的鑒別，主要以觸須的多少為據(jù)。仔鼠4周左右斷奶，生后3個(gè)月可用地交配。雄裸大鼠可用至7月齡，雌半裸大鼠（rnu/+)可用至一年多。在潔凈環(huán)境下，壽命最長(zhǎng)的裸大鼠可活1～1.5年。

⑷易患呼吸道疾�。郝闶笠驘o(wú)胸腺，免疫力低下，易患各種疾病。裸小鼠易患鼠肝炎，而裸大鼠易患潰瘍性氣管支氣管炎及化膿性支氣管肺炎。其病因可能與仙臺(tái)病毒感染有關(guān)。飲水中加入四環(huán)素，對(duì)控制裸大鼠呼吸道感染有明顯效果，使壽命延長(zhǎng)，如加四環(huán)素200～800mg/L，則平均壽命由116.8天延長(zhǎng)到157.2天。

（二)裸大鼠的應(yīng)用

裸大鼠目前主要應(yīng)用于人癌的移植研究。因裸大鼠無(wú)胸腺，缺少T細(xì)胞，故能成功地移植異種皮膚和異種腫瘤，包括小鼠腫瘤及人腫瘤。Festing首先報(bào)告了裸大鼠異種腫瘤移植（人結(jié)腸癌及小鼠漿細(xì)胞瘤)，但移植瘤生長(zhǎng)后自發(fā)消退。此后陸續(xù)見(jiàn)到有關(guān)人癌細(xì)胞株及手術(shù)標(biāo)本移植于裸大鼠的報(bào)導(dǎo)。裸大鼠人癌移植最常用皮下途徑，也有用腎內(nèi)、腦內(nèi)肌肉內(nèi)者。可以生長(zhǎng)于裸大鼠的移植人瘤有黑色素瘤、惡性膠質(zhì)瘤、以及結(jié)腸、胰腺、肺、乳腺、腎、前列腺、外陰、宮頸等癌瘤。大多數(shù)人癌移植后，可見(jiàn)自行消退，僅少數(shù)腫瘤呈進(jìn)行性生長(zhǎng)。Colston報(bào)告9例人癌細(xì)胞株，7例移植成功，僅一例黑色素瘤呈進(jìn)行性生長(zhǎng)而未自發(fā)消退。Stragand報(bào)告兩例人結(jié)腸癌細(xì)胞株移植成功，但只有Lovo細(xì)胞株呈進(jìn)行性生長(zhǎng)；而另一株SW620移植成功后，90%裸大鼠可見(jiàn)腫瘤自發(fā)消退。Williams移植了5例人泌尿生殖系腫瘤細(xì)胞株于裸大鼠，3株成功，僅1株腎癌未見(jiàn)自發(fā)消退。其自發(fā)消退的原因尚不十分清楚，推測(cè)與裸大鼠T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能，特別是NK細(xì)胞活性較強(qiáng)有關(guān)。但有作者認(rèn)為，自發(fā)消退的原因這一可能與選用之裸大鼠年齡較大有關(guān)，而選用4周齡的幼裸大鼠可提高移植成功率。

最近國(guó)內(nèi)中山醫(yī)院肝癌研究所室成功地建立了裸大鼠人肝癌模型LTNR1及LTNR2，這是裸大鼠人肝癌組織模型的首次報(bào)導(dǎo)。他們還作了有關(guān)裸大鼠人癌移植研究的報(bào)導(dǎo)。可參考本書(shū)第九章第四節(jié)文獻(xiàn)。LTNR1及LTNR2分別取材于裸小鼠人肝癌組織模型LTNM4及LTNM3。裸大鼠平均鼠齡為31.5(9～49)天，采用皮下移植途徑。通過(guò)病理及AFP檢測(cè)，證實(shí)裸大鼠人肝癌移植成功，至今已傳14代及5代。兩模型均具有如下特征：①保留了原人肝癌形態(tài)及功能特征，LTNR1及LTNR2均為等分化（Ⅱ-Ⅲ級(jí))的肝細(xì)胞癌。LTNR1的AFP濃度較高，中位濃度8000ng/ml：LTNR2較低，不超過(guò)125ng/ml。②保留了裸小鼠人肝癌模型LTNM4及LTNR3的某些優(yōu)點(diǎn)：傳代移植成功率高，LTNR1及LTNR2分別為100%（65/65)及87.5%（14/16)；自發(fā)消退率低，3.1%(2/65)及0（0/14)；潛伏期短，12.7±3.9天及17.0±6.2天；腫瘤生長(zhǎng)快速，平均每周幾乎平均直徑增長(zhǎng)9.1±2.7mm與8.8±3.4mm。③具有產(chǎn)瘤量大，取血量多，較便于實(shí)行某些外科小手術(shù)等優(yōu)點(diǎn)。目前，已應(yīng)用這些模型開(kāi)展了探索腫瘤標(biāo)記、試行陽(yáng)性掃描及實(shí)驗(yàn)性治療等研究，并取得了初步陽(yáng)性結(jié)果。

裸大鼠人肝癌模型的建立，不僅有利人肝癌的研究，而且給各種人癌移植帶來(lái)了新的希望。裸大鼠人癌模型的建立，可彌補(bǔ)裸小鼠人癌模型的某些不足，更好地促進(jìn)腫瘤研究的進(jìn)展。