由上可見，在分析紅細胞溶解后的全血時，必須先采用雙指標二維點圖。從圖上也可清楚地看出，粒細胞、未被溶解的紅細胞和一些渣滓，由于不同的體積和致密度，明顯地區(qū)別于淋巴細胞和單核細胞從而能把它們分開�？吹角宄募毎秩阂院�，可以在計算機的顯示屏上將所要分析的細胞畫線框出，并通過指令送入存貯器，以后就可只對框出部分做各種數(shù)據(jù)分析和深入考查。圖10-11就是對雙指標點圖上的淋巴細胞群框定的示意圖。數(shù)字所表示的意思和圖10-9相同。
圖10-10 外周血白細胞及PBMC的單指標直方圖
圖10-11 雙指標點圖上細胞的框定
2．單維直方圖上陰性分界游標設(shè)置前面已經(jīng)強調(diào)，在用FCM分析時，陰性對照是必不可少的。首先用非染色細胞，根據(jù)前面介紹的雙指標二維點圖的辦法，將某一細胞群框定；然后分別選用綠色熒光（GFL)和紅色熒光（RFL)單指標直方圖。在直方圖上所出現(xiàn)的細胞均為陽性�？捎酶淖僄FL和RFL增益的辦法，將細胞恰好調(diào)節(jié) 到左側(cè)并設(shè)立游標（圖10-12)。
然后再測試MsIg染色的陰性對照。某些細胞，由于膜上的Fc受體可以與對照抗體鼠Ig非特異性結(jié)合，因而有一定的背景染色，不過這種陽性百分率不應(yīng)超過5%。所以MsIg與非染色細胞的分界游標確立后，以后所測試的標本以此為標準，游標位置基本不變。
圖10-12 陰陽性細胞分界游標的設(shè)置
MsIg的紅、綠熒光陰陽性分界游標確立以后，可以測試實驗標本。首先檢查細胞分群情況，然后檢查淋巴細胞群是否落在已輸入計算機的淋巴細胞框定的范圍里。若染色及FCM的工作性能都正常，則框定的位置不會改變。然后轉(zhuǎn)換成熒光直方圖。若為FITC標記的細胞，則GFL為X軸；若為PE標記的細胞，則用RFL為X軸。由于陰陽性分界游標記已確立，細胞陽性率及圖像均顯示于計算機熒光屏上；同時也可選用其它指標和圖像、打印所需的資料等。
