(一)各單位要成立醫(yī)學實驗動物管理委員會或小組,其機構(gòu)由科研、實驗動物及有關(guān)行政管理人員組成。其領(lǐng)導工作由院(所)級主管科研工作的領(lǐng)導同志負責。
(二)凡從事實驗動物生產(chǎn)和供應的單位必須配備一定數(shù)量的高、中、初級職稱的醫(yī)藥衛(wèi)生、畜牧獸醫(yī)或生物學的專業(yè)人員。
(三)凡飼養(yǎng)、使用實驗動物的單位,要配備一定數(shù)量的技士、技工級飼養(yǎng)技術(shù)人員。
(四)飼養(yǎng)技術(shù)人員應有半數(shù)以上人員具有初中以上文化程度,所受專業(yè)培訓應不少于三個月,班、組長應不少于六個月。
(五)專業(yè)人員每年必須體檢一次,對患有傳染病者,應及時調(diào)離。
(六)為保證實驗動物飼養(yǎng)技術(shù)隊伍的相對穩(wěn)定性,其工作周期一般不得少于五年。
(七)為利于醫(yī)藥衛(wèi)生、科研、教學工作,建議相當于局級以上單位成立處一級的實驗動物機構(gòu)?h、團級單位成立科級機構(gòu)或隸屬于本單位的科研機構(gòu)。
(八)各單位要對飼養(yǎng)技術(shù)員的培養(yǎng)教育、職稱評定、勞動保護等給予充分重視。
(一)普通動物(通常動物)
1.外環(huán)境條件:
(1)院容整齊、清潔、定期消毒;
(2)有一定的綠化面積;
(3)應有專用的垃圾、動物尸體的存放處,并應及時清除;動物尸體須在24小時內(nèi)焚燒或按有關(guān)規(guī)定處理;
(4)動物室附近不得飼養(yǎng)非實驗用的家禽家畜。
2.動物室建筑條件:
(1)要達到一定的建筑標準;
(2)中小型動物飼養(yǎng)室進出口不得直接對外,應有緩沖間;
(3)玻璃窗加防昆蟲的紗門紗窗;
(4)天花板光潔、能消毒;
(5)地面平坦、地面及墻壁能洗刷;
(6)要有自來水和封閉式的下水道(防止野鼠竄入);
3.飼養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境條件:
(1)室溫應在18度至29度之間(年溫差)(大、小鼠、豚鼠、地鼠等);
(2)相對濕度60%±20%;
(3)空氣中氨含量應低于20ppm;
(4)室內(nèi)噪聲60分貝以下;
(5)飼養(yǎng)室內(nèi)要整潔,無雜物、污物、無蚊、蠅、蟑螂等。
4.籠、飼具條件:
(1)應使用易于清潔消毒及操作的籠具;
(2)飼具及飲水用具應能進行消毒,不生銹者。
5.管理條件:
(1)制度:要有動物室規(guī)程,操作規(guī)程崗位責任制,工作定額;
(2)工作記錄:有籠卡,有飼養(yǎng)室日記,有動物帳目;
(3)環(huán)境記錄:溫度、濕度等要如實填寫;
(4)人員衛(wèi)生:要穿清潔的工作服,戴工作帽,口罩,手套,工作鞋等;
(5)鋪墊物要消毒;
(6)要有動物室工作人員專用的洗澡設備。
6.衛(wèi)生防疫設施:
(1)要有洗刷、消毒設備和制度;
(2)有隔離、檢疫設施以及防疫措施。
(二)清潔動物
除達到普通動物要求之外,還必須達到下列各項要求:
1.建筑條件:
(1)盡可能做到清潔與污染分開;
(2)門、窗要達到密封的要求;
(3)有緩沖間;
(4)有沐浴室或更衣室。
2.飼育室內(nèi)環(huán)境條件:
(1)相對濕度 60%±5%;
(2)室內(nèi)噪聲在55分貝以下;
(3)換氣裝置:強力通風,有中效過濾,有空調(diào)裝置;
(4)換氣次數(shù):全新風8次/小時,室內(nèi)為正壓;
(5)室內(nèi)無昆蟲;
(6)室內(nèi)照明:明暗各12小時左右,或符合要求的自然采光;
(7)飼養(yǎng)室內(nèi)墻壁的較低部位及地面每周消毒兩次;
(8)排污物(包括鋪墊物等)設施應是半封閉式的,能進行消毒,以防交叉污染。
3.管理條件:
(1)工作服、帽、飼料、籠、飼具有等要消毒;
(2)工作人員進入飼育區(qū)之前,最好要沐浴更衣。
無特殊病原體動物與無菌動物設備的要求,各單位可根據(jù)相應的病原菌和病毒檢定標準而自行處理。
(三)實驗動物實驗室
動物實驗室的檢定標準最低要達到相應的實驗動物飼育室的標準。具體要求參照上述條件。
表一 實驗動物病原菌檢測等級標準
動物等級 | 病原菌 | 動物種類 | 檢驗方法 |
| |||||||||
小鼠 | 大鼠 | 豚鼠 | 地鼠 | 兔 | 狗 | 猴 | 分離培養(yǎng) | 免疫診斷 |
| ||||
四級:無菌動物 | 三級:無特殊病原體動物 | 二級:清潔動物※種子應來源于剖腹產(chǎn) | 一級:普通動物 | 沙門氏菌All Species of Salmonella 單核細胞增多性李氏桿菌Listeria monocytogenes 假結(jié)核耶氏菌 Yersinia Pseudotuberculosis 狗布魯氏菌Brucella Canis 志賀氏痢疾菌Shigella 結(jié)核分枝桿菌 Mycobacterium tuberculosis 皮膚真菌 螺旋體 | 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | 0 0 | 0 0 0 | √ √ √ √ √ √ √ | √ √ √ |
出血敗血性巴氏桿菌Pasterella multocida 支氣管敗血性包特氏菌 Bordetella bronchiseptica 念珠狀鏈桿菌Streptobacillus moniliformis 結(jié)腸耶爾氏菌Yersinia cnteroolitica 肺支原體Mycoplasma Pulmonis 神經(jīng)支原體Mycoplasma neuroticum 關(guān)節(jié)支原體Mycoplasma arthritidis 鼠棒狀桿菌Corynebacterium muris 泰澤氏菌Bacillus Piliformis | 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 | √ √ √ √ √ √ √ √ | √ √ √ | ||||||
嗜肺巴氏桿菌Pasteurella Pneumotropica 克雷伯肺炎桿菌Kleb siella Pneumonia 金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus 肺炎鏈球菌Streptococcus pneumonia 化膿性鏈球菌Streptococcus pyogeones 綠膿桿菌Pseudomonas aerginosa 特定病原菌 | 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 | ||||||||
*應排除一切可能查到的微生物 | 注 V檢驗方式 ○要求沒有 注:0要求沒有 |
表二齒嚙類實驗動物的病毒檢測等級標準
動物等級 | 病 毒 | 動物種類 |
| |||||||
小鼠 | 大鼠 | 豚鼠 | 地鼠 |
| ||||||
四級 :無菌動物 | 三級 :無特殊病原體動物 | 二級 :清潔動物 | 一級 :普通動物 | 淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒Fymphocytic Choriomeningitis virus(LCM) 流行性出血熱病毒Epizootic hemorrhagic fever virus(EHFV) 小鼠脫腳病病毒(鼠痘病毒)Ectromlia uirus (Poxvirus of Mouse) | 0 0 0 | 0 0 | ||||
鼠肝炎病毒Mouse hepatitis virus (MHV) 猴病毒Simian virus5(SV5) | 0 | 0 | 0 | |||||||
仙臺病毒Sendai virus 小鼠肺炎病毒Pneumonia virus of mice(PVM) 呼腸孤病毒3型Reovirus type 3(Reo-3) 小鼠腦脊髓炎病毒Mouse Encephalomyelitis virus 小鼠腺病毒Mouse Adenovirus (MAd) K病毒K virus(KV) 小鼠微小病毒Minute virus of mice(MVM) 多瘤病毒Polyoma virus 小鼠腦心肌炎病毒Mouse Encephalomyocarditis virus Toolan:s病毒(H-1)Toolan:s virus(H-1) 大鼠潛在病毒Kilham:s rat virus(KRV) 大鼠冠狀病毒Rat corona virus(RCV) 大鼠涎淚膜炎病毒Sialodacryoadenitis virus | 0 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | ||||||
新生小鼠流行性腹瀉病毒(EDIM)Epizootic diarrhea of infant mice (EDIM) 胸腺病毒Thymic virus 乳酸脫氫酶病毒Lactic Dehydrogenase virus(LDH) 小鼠巨細胞病毒Mouse cytomegalovirus(MCMV) 大鼠巨細胞病毒Rat cytomegalovirus(RCMV) 豚鼠巨細胞病毒Guinea pig cytomegalovirus(GPCMV) 豚鼠皰疹病毒Guinea pig herpesvirus | 0 0 0 0 | 0 | 0 0 | |||||||
注:0要求沒有
表三實驗兔、貓、狗、猴的病毒檢測等級標準
動物等級 | 病毒 | 動物種類 |
| |||||
兔 | 貓 | 狗 | 猴 |
| ||||
四級 :無菌動物 | 三級 :無特殊病原體動物 | 二級 :清潔動物 | 一級 :普通動物 | 狂犬病毒Rabies virus B病毒B virus | 0 | 0 | 0 | |
貓白細胞減少癥病毒(細小病毒)Feline Panleukopenia virus 狗細小病毒Canine Parvcvirus 猴泡沫病毒Simian Spumavirus 猴病毒Simian virus 40(SV 40) | 0 | 0 | 0 0 | |||||
狗病毒性肝炎病毒(狗腺病毒)Canine viral hepatitis virus 兔痘病毒Rabbit Poxvirus 兔輪狀病毒Rabbit rotavirus 兔皰疹病毒Rabbit herpesvirus 兔冠狀病毒Rabbit coranvirus 貓輪狀病毒Feline rotavirus 貓冠狀毒素Feline coroanvirus 貓嵌杯樣病毒Feline calicirus 狗輪狀病毒Canine rotavirus 貓病毒性鼻氣管炎病毒(皰疹病毒)Feline rhinotracheitis virus 狗皰疹病毒Canine herpesvirus 狗痘熱病毒(副流感病毒)Canine distemper virus 猴痘病毒Simian poxvirus 猴輪狀病毒Simian rotavirus 猴腺病毒Simian adenovirus | 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | 0 0 0 0 | 0 0 0 | ||||
注:0要求沒有
表四 實驗動物寄生蟲監(jiān)測等級標準
動物等級 | 寄 生 蟲 | 動物種類 |
| ||||||||
小鼠 | 大鼠 | 鼠 | 兔 | 貓 | 狗 | 猴 |
| ||||
四級 :無菌動物 | 三級 :無特殊病原體動物 | 二級 :清潔動物 | 一級普通動物 | 體外寄生蟲(節(jié)肢動物) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
利杜體Leishmania donovani 弓漿蟲Toxoplasma gondii 腦原蟲Encephalitozoon 球狀附紅細胞體Eperiythrozoon coccoides 水泡帶絳蟲Taenia hydatigena 豆狀帶絳蟲Taenia pisformis 貓泡尾帶絳蟲Hydatigena taeniaeformis 短膜殼絳蟲Hymenolepis nana 長膜殼絳蟲Hymenolepis diminuta 孟氏裂頭絳蟲Spirometra mansoni 華枝睪吸蟲Clonorchis sinensis 貓后睪吸蟲Opisthorchis felineus 衛(wèi)氏并殖吸蟲Paragonimus westermani 貓鉤蟲A brasiliense 犬弓蛔蟲Toxocara canis 鼠管狀線蟲Syphacea obvelata 四翼無刺線蟲Aspiculuris tetraptera 結(jié)膜吸吮線蟲Thelazia callipaeda 棘腭口線蟲Cnathostoma spinigerum 犬惡絲蟲Dirofilaria immitis 猴結(jié)節(jié)線蟲Oesophagostomum apiostomum 腎膨結(jié)線蟲Dioatophyma renale 鼠肝體Hepatozoon muris 肝毛線蟲Capillarria hepatica 貓弓蛔蟲Toxocara cati 兔曉蟲Passalurus ambiguus | 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 O 0 0 | 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 | ||||
體內(nèi)、外所有寄生蟲 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
一級:普通動物
外觀:毛色光澤清潔,貼身、活沷,行動無異常。頭臉不腫、背不穹起。四肢、尾和皮膚無缺損。不喘,鼻無分泌物。肛門清潔。
病理解剖:肝、脾、淋巴結(jié)不腫大。肺、肝、脾、腎無肉眼可見病灶。
二級:清潔動物
具有一級普通動物指標,顯微鏡檢查沒有二級微生物病原的病變。
三級:無特殊病原體動物
具有一級普通動物指標和,無二和三級動物的微生物病原的病變。
四級:無菌動物
除具有一級普通動物指標外,不含有二和三級動物微生物病原的病變。脾、淋巴等臟器具有無菌動物的組織學結(jié)構(gòu)。
有關(guān)遺傳突變,免疫抑制等動物可根據(jù)各個品系特征的規(guī)定檢查。
(一)管理制度
1.引種來源清楚,應帶有譜系及特性資料(如近交代數(shù)、交配方式、遺傳組成、生物學特性),并應符合國際公認的遺傳概貌標準。
2.按國際規(guī)定的近交系動物的繁殖系統(tǒng),進行種群維持和生產(chǎn)。
(1)基礎群和血緣擴大群:
應以同胞兄妹交配方法進行。基礎群的維持一定按著近交系的保種方法進行,并應具有譜系及個體卡片記錄。
(2)生產(chǎn)群:
以隨機交配方法(或紅綠燈方法)進行生產(chǎn)?蛇B續(xù)繁殖3-5代,其生產(chǎn)群種鼠應與基礎群血緣關(guān)系保持相對平行。
(二)遺傳質(zhì)量檢查
1.方法的選擇:
(1)異體皮膚移殖法:無論是大鼠,還是小鼠異體皮膚移植的方法,一直是鑒定近交品系的經(jīng)典方法,由于該方法既經(jīng)濟,又權(quán)威,為首選方法。
(2)生化電泳方m.quanxiangyun.cn/kuaiji/法:是近些年來利用同功酶和蛋白質(zhì)的多態(tài)性對近交系動物進行遺傳監(jiān)測的一種常規(guī)方法。由于其快速、準確、靈敏,在檢出亞系動物時,比起皮膚移殖法,有其獨特之處,可作為近交系小鼠遺傳質(zhì)量檢查的又一重要方法。
2.位點的選擇:
近交系動物遺傳品質(zhì)的變異,主要有三方面的因素:
(1)遺傳污染;
(2)遺傳漂變;
(3)遺傳突變。
在這三方面中遺傳污染危害最大,而另兩方面,在一定時間內(nèi)發(fā)生改變的頻率很低。因此,在位點選擇上,根據(jù)北京市現(xiàn)在常用的10種近交系小鼠,選擇了位于7個染色體上八個差異性位點,作為檢查的第一線位點。如果任何一種品系發(fā)生過遺傳污染,這八個位點中某些位點將會出現(xiàn)雜合或者變異?紤]到位點的選擇盡量分布在多個染色體上,我們又選擇了位于5個染色體上的五個比較容易操作,耗資較少的位點作為第二線位點的檢查。原則上,第一線位點的檢查如果發(fā)現(xiàn)了問題,將不再進行第二線位點的檢查。
第一線位點:
Hbb,Car-2,Gpd,ES-1,ES-3,Trf,Gp1,ldh-1。
第二線位點:
Mup,Pgm-1,ES-10,Sep-1,Ce-2。
3.動物的選擇:
近交系大、小鼠每個品系至少進行四只動物的異體皮膚移植。近交系小鼠皮膚移植成功者還需從核心群中選送四只動物(2♀,2♂年齡不限)進行生化位點的檢查。皮膚移植失敗者,則不考慮進行生化位點的檢查。
4.結(jié)果的判斷:
將檢測報告匯總,由專家小組作出結(jié)論。
見附表五:差異性位點的選擇和10種近交系小鼠的遺傳概貌。
表五
Chromosome Locus/Strain | 7 | 3 | 4 | 8 | 11 | 9 | 7 | 1 |
Hbb | Car-2 | Gpd | ES-1 | ES-3 | Trf | Gpi | Ldh-1 | |
615 | S | a | m.quanxiangyun.cn/Article/b | b | O | b | a | a |
TA1 | S | b | b | a | a | b | a | |
Ta2 | d | a | b | b | c | b | b | a |
T739 | S | b | b | b | O | b | a | a |
BALA/C | d | b | b | b | a | b | a | a |
C57BL/O | S | a | a | a | a | b | b | a |
CBA/N | d | a | b | b | c | a | b | b |
C3H/He | d | b | b | b | c | b | b | a |
DBA/2 | d | b | b | b | c | b | a | b |
KK | S | a | a | b | c | b | b | a |
供給營養(yǎng)適宜的飲料是保證實驗動物正常生長、發(fā)育、繁殖以及各種外界因素的反應保持相對恒定,增強體質(zhì)的重要條件。特要求如下:
(一)適宜的營養(yǎng)成分
見表。
實驗動物飼料的各種營養(yǎng)供給參考標準
動物種類/營養(yǎng)成分 | 大鼠、小鼠、地鼠 | 家兔、豚鼠 |
蛋白質(zhì)克% | 20-25 | 18-20 |
脂肪克% | 5-10 | 4-8 |
鈣克% | 0.9-1.2 | 1.2-1.5 |
磷克% | 0.6-0.8 | 0.8-1.0 |
賴氨酸克% | 8-10 | 7-9 |
蛋氨酸克% | 4-6 | 4-6 |
維生素A I·U/100克 | 1500 | 1500 |
維生素D I·U/100克 | 200 | 200 |
維生素C mg/100 克 | 0 | 60-80 |
考慮到原糧中維生素E含量已夠,故表中不再例入。特殊的實驗需要可加入5-10mg/100g。
注:除以上主要營養(yǎng)成分,還必需有適宜量的維生素、微量元素及纖維素等營養(yǎng)成分。
(二)科學設計各種實驗動物飼料配方
1.各種實驗動物的飲料配方,應根據(jù)其不同需要量科學設計。
2.應根據(jù)不同實驗動物的特異需要,適當添加蛋白質(zhì)、維生素C及纖維素等。
3.確定后的飲料配方不得任意更改,力求穩(wěn)定。
4.飼料中不得添加抗菌劑、抗蟲劑、防腐防霉劑及激素等其它藥物。
5.不得用非標準飼料,飼養(yǎng)實驗動物。
(三)原料要求及保管
1.精選新鮮、無雜質(zhì)、無毒、無污染、無霉變、無蟲蛀鼠咬的各種原料。
2.應設專門飼料庫房:
飼料庫房應保持干燥、通風、無蟲、無野鼠,經(jīng)常保持清潔衛(wèi)生,各種飼料或原料應分類堆放整潔。
3.維生素類原料應存放在避光、低溫、干燥處。
4.加工后成品與原料應分開保管。
5.飼料庫房內(nèi)嚴禁存放雜品及毒性藥品等。
6.飼料庫必須嚴格領(lǐng)發(fā)、保管制度及完善管理手續(xù)。
(四)加工制作
選擇優(yōu)質(zhì)原料按飼料配方比,準確稱重,充分混勻。植物油、維生素及無機鹽類先與少量粉料混勻再與大量粉料充分混勻后加工。制成的料塊應有適宜的硬度及適品性。
料塊成品裝入無毒清潔飼料桶或清潔牛皮紙袋內(nèi),封口貼有或掛有注明飼料種類、制作日期及制作人的標簽,成品料塊存放不得超過兩個月。
(五)定期檢測分析營養(yǎng)成分
各種飲料成品應每半年抽樣檢測單位,分析營養(yǎng)成分一次。特殊情況必要時隨時抽樣檢測分析。
九、實驗動物檢疫要求
為了預防實驗動物群體中發(fā)生傳染病。避免新引起的動物對原有動物及有關(guān)人員造成危害,提高實驗動物的健康水平,特規(guī)定如下:
1.新引起的動物必須隔離,確認無病之后,方可移入飼養(yǎng)區(qū)!2.不從疫區(qū)引起動物。3.動物發(fā)生傳染病死亡應及時進行處理(病理尸檢或?qū)嶒炇覚z查)作出診斷,提出處理意見,報請有關(guān)負責人及主管部門!4.有病的動物不準做動物實驗,發(fā)生傳染病時,原則上全部銷毀。房屋、用具、籠具架、墊料、衣服、鞋帽等必須進行徹底消毒,動物室封鎖一定時間后才能開放。 5.實驗動物發(fā)生烈性傳染病流行時,應立即報告北京醫(yī)學實驗動物管理委員會,同時采取嚴格的隔離措施,以兔傳染病蔓延。如有拖延或隱瞞不報者,所在單位要承擔責任,并吊銷其合格證。 6.野生動物的檢疫,應由使用單位就地進行,在確認無人畜共患病及動物傳染病之后方可使用。